【摘 要】
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以PCR技术从金黄色葡萄球菌基因组DNA中首次克隆编码成熟SEC2蛋白的全基因sec2.该基因共717bp,编码239个氨基酸,Genbank Accessionnumber:AY450554.构建了SEC2的表达载体pET-
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以PCR技术从金黄色葡萄球菌基因组DNA中首次克隆编码成熟SEC2蛋白的全基因sec2.该基因共717bp,编码239个氨基酸,Genbank Accessionnumber:AY450554.构建了SEC2的表达载体pET-28a-sec2,并在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达可溶性rSEC2蛋白.经亲和层析纯化,其纯度在95％以上,平均回收量为每升培养物40mg.纯化的rSEC2保持了与野生型相当的生物学活性.以限制性核酸内切酶连接技术分别将两个抗人表皮生长因子受体HER-2单链抗体基因通过DNA Linker与sec2融合,构建融合基因b-l-sec2和ml-l-sec2,并以两种方式表达纯化.用PCR方法扩增了编码TrxA蛋白的基因trxA并克隆至表达载体pET-28a启动子上游,构建了一种在单质粒中利用两个相同的启动子游离共表达硫氧还蛋白与目的蛋白的表达载体.利用该载体可使TrxA与外源蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中以非融合形式高效共表达.共表达的TrxA可明显促进外源蛋白单链抗体ML3.9(scFv-ML)、3-羟基苯甲酸-6-单加氧酶(3HBA)的可溶性表达;并明显减少肠毒素C2(SEC2)、结核杆菌螺旋酶A亚基(GYRA)的包涵体表达.
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