【摘 要】
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与动物生殖细胞的发生方式不同,植物的生殖细胞是由位于生殖器官特殊部位的分生细胞重新分化形成的,在这一过程中,控制体细胞向生殖细胞转化的基因起着决定作用。之前研究发现在
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与动物生殖细胞的发生方式不同,植物的生殖细胞是由位于生殖器官特殊部位的分生细胞重新分化形成的,在这一过程中,控制体细胞向生殖细胞转化的基因起着决定作用。之前研究发现在突变体spl(sporocyteless)中,拟南芥雌、雄生殖细胞均无法正常形成,停滞在孢原细胞向大/小孢子母细胞转变的时期,因此SPL是控制体细胞向生殖细胞转化的关键基因。 为阐明SPL在植物体细胞向生殖细胞转换过程的调控功能,我们采用酵母双杂交手段,得到了两个能够与SPL相互作用的泛素相关的蛋白质,分别命名为SIP3(SPL Interacting Protein3)和SIP4(SPL Interacting Protein4)。研究发现,SIP3编码一个具有C3HC4-RING结构域的蛋白质,推测其可能具有泛素连接酶的活性。体外泛素化实验证明,SIP3具有E3泛素连接酶的活性,而且,我们对拟南芥基因组中37个泛素载体蛋白E2进行筛选,证明UBC6作为泛素载体蛋白E2,参与了SIP3在对底物的泛素化过程中。SIP4的N端具有CUE结构域,我们进一步验证,SIP4具有结合单泛素的能力。 SPL是一个有多种结构域的转录因子,我们推测,该蛋白不同的结构域可能具有不同的功能。通过酵母实验证明,SPL的C末端具有转录激活活性,但其N端的碱性区域却可以抑制这一活性。由于SPL基因仅在孢原细胞/孢子母细胞等高度特化细胞表达,表达量低,表达产物不稳定,难以进行CHIP实验,因此我们在体外表达、纯化SPL蛋白后,将其与拟南芥基因组DNA片段进行孵育,获得了该蛋白的DNA结合序列,证明SPL可与G-A-G---T(A/G)T---T---T序列相结合。因G-A-G---T(A/G)T---T---T序列为一不对称序列,异于其他转录因子所结合的对称性的DNA序列,因此我们推测SPL可能是以二聚体的形式与DNA相结合的,目前这一推测已经得到PULL DOWN实验的证实。 在该研究中,我们发现了控制拟南芥体细胞向生殖细胞转化的关键基因SPL参与了蛋白质的泛素化修饰;而且SPL可能是一个双重转录因子,既可以激活某些基因的转录,也可以抑制另外一些基因的表达,在不同的部位和环境中,具有相异的转录活性,从而调控不同的下游基因的表达,完成其重要功能。广而言之,SPL所具有的这种复杂调控功能,可能是生物体内某些重要控制因子所普遍采取的一种调控方式。
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