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目的：研究鸦胆子素D（bruceine D，BD）对高危型人类乳头瘤病毒(humanpapillomavirus， HPV)16型感染细胞人宫颈永生化Ect1/E6E7细胞系是否具有增殖抑制作用，及其可能机制，为鸦胆子素D应用于癌前病变及癌症治疗领域提供实验依据，为临床综合治疗提供新的思路。
方法：
1.以人宫颈鳞状上皮永生化细胞系(Ect1/E6E7)作为HPV16型感染的宫颈癌前病变的体外实验模型，用1，5和10μmol/L鸦胆子素D分别体外作用于细胞24、48、72h，倒置显微镜下观察细胞形态学改变;
2.采用MTT法测定鸦胆子素D对Ect1/E6E7细胞体外培养增殖活性改变;
3.采用细胞周期法测定鸦胆子素D对Ect1/E6E7细胞生长周期的影响;
4.采用Hoechst33258细胞核荧光染色法观察鸦胆子素D作用后Ect1/E6E7细胞凋亡情况;
5.采用Annexin V-FITC/PI双染色法检测不同浓度鸦胆子素D作用后Ect1/E6E7细胞凋亡率的变化;
6.实时荧光定量PCR检测Ect1/E6E7及Caski两种细胞经不同浓度鸦胆子素D作用后HPV16 E6、E7基因mRNA的表达。
结果：
1.倒置显微镜观察到不同浓度鸦胆子素D对Ect1/E6E7细胞作用不同时间后细胞有形态学变化，且随着时间延长、浓度增加，变化更加明显;
2.MTT结果显示Ect1/E6E7经1、5、10、15、30μmol/L鸦胆子素D作用24、48、72h后，具有明显的抑制体外增殖作用，抑制呈时间和浓度的依赖性，差异有统计学意义（P＜0.05）;
3.经1、5、10μmol/L鸦胆子素D体外作用48小时后，细胞生长周期停滞于G1期;
4.Hochest33258细胞核染色法显示Ect1/E6E7细胞经5μmol/L鸦胆子素D体外作用48小时后，细胞发生凋亡，可观察到凋亡小体产生。
5.流式细胞仪检测显示，各实验组细胞经鸦胆子素D作用48小时后，细胞凋亡率分别为(6.25±0.76)％、(20.21±1.32)％、(8.61±1.59)％，与对照组比较差异具有统计学意义（P＜0.05）;
6.Real-time PCR结果显示经1、5、10μmol/L鸦胆子素D体外作用48小时后，Caski细胞内HPV16 E6、R7 mRNA表达水平下降，与对照组比较差异具有统计学意义（P＜0.05），而Ect1/E6E7细胞内HPV16 E6、R7 mRNA表达水平下降，但与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。
结论：
通过体外培养Ect1/E6E7细胞，在不同浓度鸦胆子素D作用不同时间后，细胞生长抑制率和细胞凋亡率增加，且呈时间和浓度的依赖性，其机制可能是通过调节对Ect1/E6E7细胞内HPV16 E6、R7mRNA表达发挥作用。