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卵巢癌(ovarian cancer)在妇科恶性肿瘤中发病率占第三位,而死亡率居第一位。由于迄今为止尚无有效的卵巢癌早期诊断方法,故确诊时约70%~80%已属晚期。根据NCCN指南,卵巢癌的初次治疗首选手术治疗,并辅以术后铂类和紫杉醇联合化疗,经过初次治疗约70-80%的卵巢癌患者能够获得临床缓解,但是仍有约60-70%的卵巢癌患者在治愈后的两年内复发,近20年来晚期卵巢癌5年生存率一直徘徊在30-40%[1-2],造成卵巢癌5年生存率低的一个重要原因是肿瘤细胞对化疗药物产生耐药性,所以卵巢癌化疗耐药不仅是当前研究的热点,也必将是卵巢癌治疗走出瓶颈的关键。
随着后基因组时代的到来及蛋白质组学理论及技术的迅速发展和完善,从蛋白质这一全新的角度寻找卵巢癌早期筛查和诊断的肿瘤标志物以及探讨卵巢癌耐药和复发机制已成为可能[3-5]。Xiu-Qin Li[10]等,应用双向凝胶电泳技术对卵巢上皮浆液性腺癌组织及正常卵巢组织蛋白进行分离,比较分析筛查差异表达的蛋白点,经肽质量指纹谱鉴定技术鉴定蛋白的身份,发现12个蛋白点不匹配,其中PRXDⅢ的表达明显上调。近些年有许多研究结果显示,PRXDⅢ在肝癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、恶性间皮瘤、恶性黑色素瘤组织、肺癌、Ⅱ-Ⅳ级星状细胞瘤细胞的线粒体中表达均较高[7-15],提示PRXDⅢ参与多种实体肿瘤中的发生、发展。迄今为止PRXDⅢ在卵巢癌中研究报道较少,而PRXDⅢ是否参与卵巢癌的铂类耐药及其机制尚不清楚。
目的:利用免疫组织化学方法观察PRXDⅢ蛋白在耐药及敏感卵巢癌组织中的表达情况,探讨其与卵巢癌患者化疗耐药情况、临床病理类型及分化之间的关系和临床意义。
资料方法:
一、标本来源
选取我院2005年至2010年之间,经我院病理科确诊并存档的卵巢癌患者的石蜡标本95例(浆液性:75例,透明细胞癌:7例,粘液性:6例,子宫内膜样:5例,移行:1例,支持细胞癌:1例),平均年龄:54.1岁,这些患者均行手术治疗(残余病灶<2cm)并术后给予以铂类药物为主的联合方案化疗。其中根据NCCN指南患者停止化疗后复发的时间,分为铂类药物耐药组、部分敏感组和完全敏感组,耐药组为化疗中病情进展或停止化疗后6个月内复发的患者;部分敏感组为停止化疗后大于6个月,但小于12个月出现复发的患者;完全敏感组为停止化疗后12个月以上才出现复发的患者。其中耐药35例,敏感60例,所有患者均按照FIGO分期进行分期,Ⅰ期22例,Ⅱ期14例,Ⅲ期58例,Ⅳ期1例。病理分级则按照我院病理科病理回报结果为准,高分化13例,中分化33例,低分化49例。
二、实验方法
①每例各取三张切片,一张片子行HE染色,常规病理组织学诊断。两张片子做组化。
②确定一抗最佳滴度。
③免疫组化法。
三、评价标准
每张切片随机选取5个高倍视野,使用NIKON-E-800光学显微镜将视野照相,并将相片传至电脑,通过NIS-Elements Br3.0软件将每张切片的5张照片进行平均光密度值分析,取5张照片平均光密度值的均值,得出半定量数值,来代表每张切片的染色程度。并运用半定量数值进行数据分析。
四、统计学方法
试验结果采用SPSS(V17.0)软件进行统计分析,率的比较采用X2检验,多组数据之间的相关性分析采用方差分析及t检验处理,P<0.05为差异有统计学意义。
结果:
一、PRXⅢ蛋白在化疗耐药及敏感卵巢癌组织中表达情况
PRXⅢ蛋白的阳性表达染色区域主要集中在细胞浆中,耐药及敏感患者PRXⅢ蛋白的表达的均值分别为0.348±0.069;0.263±0.072。对两组数据进行独立样本T检验,耐药组表达高于敏感组,有显著差异性(P<0.001)
二、PRXⅢ蛋白在各种病理类型卵巢癌组织中的表达情况
在卵巢浆液性乳头状腺癌、卵巢透明细胞癌、卵巢粘液性囊腺癌、卵巢移行细胞癌、卵巢支持细胞瘤、卵巢子宫内膜样癌中PRXⅢ的表达的平均数分别为0.292、0.287、0.337、0.237、0.376、0.275。因卵巢移行细胞癌、卵巢支持细胞瘤的例数较少,不将上述两种病理类型进行统计。单因素方差分析结果表明,4种肿瘤之间PRXⅢ的表达无明显统计学差异(F=0.660,P=0.579)。
三、PRXⅢ蛋白的表达与卵巢癌患者临床分期及分级之间的关系
单因素方差分析结果表明,不同分化的肿瘤组织中PRXⅢ的表达亦无明显统计学差异(F=1.925,P=0.152);不同临床分期的肿瘤组织中PRXⅢ的表达也无明显统计学差异(F=0.988,P=0.402)。
结论:
我们的结果PRXDⅢ蛋白在耐药组卵巢癌组织中表达明显高于敏感组,提示PRXDⅢ蛋白的异常表达导致肿瘤细胞内H2O2的调节异常,可能是导致卵巢癌耐药的众多因素之一。