干扰素(Interferon,或IFN)是一种由免疫细胞分泌的促炎症细胞因子,人们目前发现的两大类干扰素包括Ⅰ型和Ⅱ型,其中Ⅱ型IFN(IFN-γ)也被称为免疫干扰素。大量研究表明,IFN-γ在许多疾病的发病机理和进程中起着至关重要的作用,尤其在抗病毒、抗增殖、分化诱导和免疫调节特性方面。此外,IFN-γ被认为是确定疾病特异性免疫反应的重要标志。因此,迫切需要建立一种可行的、准确的方法在实际样品中检测IFN-γ。本研究从NCBI数据库获取并合成了编码人源IFN-γ成熟肽的DNA序列,基因大小为438 bp。PCR扩增获得该基因,通过基因工程方法构建了人源IFN-γ的重组表达载体pET28a-ifn-γ,转化大肠杆菌后经IPTG诱导表达,纯化后获得了分子量大小约20 kDa的重组蛋白。利用纯化的IFN-γ作为抗原免疫小鼠,从免疫小鼠的脾脏中提取总RNA,然后通过反转录PCR获得cDNA,以该cDNA为模版,扩增出抗体的轻、重链可变区VL和VH基因。以(Gly4Ser)3基因为linker,经SOE-PCR组装出scFv序列,并将其构建到噬菌体载体pCANTAB-5E上,转化进宿主菌大肠杆菌TG1内扩增,得到库容量为1.0×108的噬菌体免疫抗体库。对噬菌体免疫抗体库进行噬菌体生物淘选,获得了一株特异性较高的单链抗体scFv-A8,其亲和力为2.6×109L/mol。通过在麦芽糖结合蛋白(MBP)与scFv之间插入Linker DNA分子以提高scFv的可溶性。表达并纯化的MBP-LK-scFv抗体蛋白用于建立人源IFN-y的间接ELISA检测方法。结果表明,该方法的检测范围为6-60pg/mL,IC50为25 pg/mL。最低检测线为2 pg/mL(1.3 fM),平均回收率为85.05%,进一步证明了基于MBP-LK-scFv的ELISA检测方法具有较高的回收率和准确性。因此,该方法可用于检测实际样品中的IFN-γ,为相关疾病的诊断提供了参考。