背景:五味子是生脉方主要的药物组成之一。目前生脉注射液已广泛用于临床心血管疾病治疗,但当其主要成分与心血管常用药物配伍时可能会产生药物之间相互作用,从而导致一系列的不良反应。有机阴离子转运多肽OATP,隶属于溶质载体超家族,广泛分布于胃肠道、肝脏、肾脏和血脑屏障等处,可介导内、外源物质的跨膜转运,是动物及人体内重要的膜转运蛋白。OATP1B1和OATP1B3特异性表达在肝脏基底膜,在药物体内吸收、分布、排泄、相互作用中扮演关键角色。因此有必要在此基础上进一步研究五味子主要活性成分五味子甲素(Sch A)及五味子乙素(Sch B)与OATPs的底物基于肝脏OATPs/Oatps介导的相互作用,为中药五味子的临床安全合理用药提供科学依据。目的:采用稳定表达OATP1B1、OATP1B3的HEK293T细胞模型,研究五味子中两种主要活性成分Sch A、Sch B对OATP1B1和OATP1B3转运底物的影响及其在OATP1B1和OATP1B3介导下的相互作用,为中药五味子及其有效成分的临床应用提供理论与实验依据。方法:1.建立Sch A、Sch B、阿托伐他汀(ATV)、瑞舒伐他汀(RSV)、替米沙坦(TMST)、氟伐他汀(FV)、牛磺胆酸钠(TCNa)在HEK293T细胞中的LC-MS方法。2.考察梯度摄取时间和药物浓度对RSV和ATV在OATP1B1-HEK293T细胞中以及对RSV和TMST在OATP1B3-HEK293T细胞中摄取的影响,分别获得各自底物在OATP1B1-HEK293T和OATP1B3-HEK293T细胞中的最佳摄取条件,并确定OATP1B1和OATP1B3细胞模型是否成功建立。3.在最佳摄取条件下分别考察系列浓度的Sch A、Sch B对RSV、ATV、FV、TCNa在OATP1B1-HEK293T的转运影响,以及对RSV和TMST在OATP1B3-HEK293T的转运影响,并与空白对照组比较通过Graphpad Prisms计算其各自的EC50或IC50。4.考察梯度摄取时间和药物浓度对Sch A、Sch B在OATP1B1-HEK293T以及在OAT1B3-HEK293T细胞中的摄取影响。接着分别考察系列浓度的OATP1B1抑制剂对Sch A或Sch B在OATP1B1-HEK293T细胞中的转运影响,以及系列浓度的OATP1B3抑制剂对Sch A或Sch B在OATP1B3-HEK293T细胞中的转运影响,并与空白对照相比较通过Graphpad Prisms计算其各自的IC50。结果:1.建立的RSV、ATV、TMST、FV和TCNa以及Sch A和Sch B的LC-MS的定量方法特异性、精密度和准确度均良好,达到从细胞样品中定量分析的要求。2.在OATP1B1-HEK293T细胞中,RSV的动力学参数Km(μM)与Vmax(nmol/mg protein·min-1)分别为23.61±5.88、0.14±0.02,ATV在OATP1B1-HEK293T细胞中的动力学参数Km(μM)与Vmax(nmol/mg protein·min-1)分别为11.25±1.23μM、1.14±0.03nmol/mg protein·min-1;在OATP1B3-HEK293T细胞中,RSV的动力学参数Km(μM)与Vmax(nmol/mg protein·min-1)分别为13.86±2.65、0.11±0.01,TMST的动力学参数Km(μM)与Vmax(nmol/mg protein·min-1)分别为5.61±1.16、4.98±0.36。3.在Sch A、Sch B对OATP1B1底物的摄取影响中,Sch A(100μM)对ATV、RSV、FV在OATP1B1-HEK293T细胞中的摄取有明显的促进作用,其促进率分别为366.41±17.21%、102.61±15.68%和24.71±3.51%;对TCNa的摄取有明显的抑制作用,其抑制率为19.62±0.44%。Sch B(100μM)对ATV、RSV在OATP1B1-HEK293T细胞中的摄取有明显的促进作用但对FV、TCNa的摄取没有影响,其对ATV、RSV的促进率分别为200.32±8.39%、252.64±9.57%。Sch A和Sch B对OATP1B3-HEK293T细胞中TMST、RSV的摄取均没有明显的作用。4.Sch A、Sch B在OATP1B1中的摄取动力学参数Km(μM)分别为17.61±0.43μM,18.45±1.23μM,Vmax(nmol/mg protein·min-1)分别7.21±0.28、1.45±0.09;Sch A、Sch B在OATP1B3中的摄取动力学参数Km(μM)分别为67.58±9.80、88.55±5.78;Vmax(nmol/mg protein·min-1)分别为1.26±0.12、1.83±0.03。OATP1B1抑制剂ATV、Rif对OATP1B1-HEK293T细胞中Sch A、Sch B的摄取有不同程度的抑制作用,在OATP1B1-HEK293T细胞中ATV(100μM)对Sch A、Sch B的抑制率分别为73.59±3.40%、35.37±2.69%。Rif(100μM)对 Sch A、Sch B的抑制率为61.65±8.48%、31.94±1.98%。OATP1B3抑制剂TMST、Rif对OATP1B3-HEK293T细胞中Sch A、Sch B的摄取并没有抑制作用。结论:1.Sch A可不同程度地促进OATP1B1介导的ATV、RSV、FV的摄取,反之,对TCNa有微弱的抑制作用;Sch B能一定程度地促进OATP1B1-HEK293T细胞中ATV、RSV的转运;Sch A和Sch B对OATP1B1转运活性的影响具有底物选择性。Sch A、Sch B对OATP1B3-HEK293T细胞中TMST、RSV的摄取并没有明显影响。2.OATP1B1特异性抑制剂ATV和Rif对OATP1B1介导的Sch A和Sch B的摄取均有不同程度的抑制作用;OATP1B3抑制剂TMST和Rif对Sch A和Sch B的摄取均无明显的抑制作用。3.Sch A和Sch B可能是OATP1B1潜在的底物,OATP1B3不介导Sch A和Sch B的摄取。