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有性杂交尤其是远缘杂交是百合育种的主要手段,而杂交不亲和及胚败育等是其主要障碍。离体授粉和胚拯救技术作为克服杂交受精前后障碍的有效手段,在百合育种工作中得到广泛应用,但还有不少技术问题需要解决。本实验以4个百合杂种系的16个品种和1个野生种为试材,研究不同离体授粉方法对百合杂交结实的影响,探索胚拯救方式、胚拯救时间、植物生长调节剂和杂交组合类型对胚拯救效果的影响,应用ISSR分子标记技术对杂交后代真实性进行鉴定,获得如下主要结果:
1.离体授粉方法对百合杂交结实的影响
对于近缘杂交,离体柱头授粉的子房膨大率和结实率分别为30%和15%,离体切割花柱授粉的分别为15%和5%,离体子房授粉的分别为25%和5%;远缘杂交组合3种授粉方法的子房膨大率和结实率分别为17%和13%、3%和3%、10%和3%。
2.胚拯救接种方式和时间对胚拯救效果的影响
杂种总萌发率、愈伤形成率和成苗率,胚珠培养的分别为3.7%、1.2%和2.0%,胚培养的为19.1%、4.2%和16.7%;授粉后30-40天接种的为6.3%、1.8%和4.0%,授粉后40-50天接种的为3.0%、1.1%和2.3%,授粉后50-60天接种的为5.8%、1.4%和3.5%。
3.植物生长调节剂和杂交组合类型对胚拯救效果的影响
杂种总萌发率、愈伤形成率和成苗率,在添加NAA+6-BA各0.1mg/L的培养基上分别为5.4%、1.6%和2.4%,添加0.1mg/LNAA的培养基上为5.6%、1.1%和3.2%,添加0.1mg/L6-BA的培养基上为6.5%、2.1%和5.2%,对照培养基上为2.7%、1.0%和2.2%;而组合L×O为14.7%、4.3%和9.3%,O×O为1.2%、0.1%和0.7%,LA×W则均为0。
4.离体授粉杂交后代的真实性
分别用2个ISSR引物对杂交组合L×O3和L×O5的亲本及3-4个子代进行检测,两个杂交组合均检测到9个位点,且子代与父、母本具共有带。
上述结果表明,不论是近缘还是远缘杂交,离体柱头授粉克服受精前障碍的效果最好,离体切割花柱授粉和离体子房授粉的效果基本相同;在授粉后30-40天将胚接种在含0.1mg/L6-BA的培养基上拯救培养的效果最好;在严格控制下经离体授粉获得的子代与父本出现ISSR标记共有带,证明所获得杂种是真实的。