论文部分内容阅读
MicroRNAs(miRNAs)是一类非编码的单链RNA,它们的长度在20至25个碱基之间。miRNA通过与mRNA的3’-非编码区结合,形成局部碱基配对以抑制mRNA的翻译或使其降解。一个mi RNA可以识别多个mRNA并与之结合,一个mRNA也可以被多个不同的mi RNA所识别并与之相互作用。研究显示miRNA的异常表达与肿瘤的发生和发展有着密切的关系,在此过程中,mi RNA可发挥抑癌基因或癌基因的作用。宫颈癌在女性恶性肿瘤中是发病率和死亡率仅次于乳腺癌的恶性肿瘤。Hsa-mi R-124(miR-124)的表达在包括宫颈癌在内的许多种肿瘤中都显著降低。为探索miR-124在宫颈癌细胞中的调节作用,本研究构建了miR-124的表达载体并筛选了稳定表达miR-124的宫颈癌细胞株。研究结果显示miRNA-124的高表达显著抑制了宫颈癌细胞的生长和迁移及侵袭能力。进一步的研究发现,CUB domain containing protein 1(CDCP1)的表达在miR-124高表达的细胞中显著降低。萤荧光素酶实验结果显示Cdcp1基因是miR-124的直接下游靶点。miR-124通过与Cdcp1基因3’-UTR位点结合从而抑制其表达。为进一步验证Cdcp1是否为有效的miR-124的下游靶点,本研究在宫颈癌细胞中共转染了miR-124和含Cdcp1开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)位点的载体,并对细胞的迁移能力进行了定量分析。实验结果显示Cdcp1基因与miR-124的共表达可以抵消miR-124对宫颈癌细胞的迁移和侵袭的抑制作用,提示miR-124通过抑制Cdcp1基因的表达来抑制宫颈癌细胞的迁移和侵袭。本研究揭示了miR-124在宫颈癌细胞中的调节作用及机制,为寻求宫颈癌治疗的新技术新方法奠定了前期基础。随着对mi RNA研究的深入,mi RNA在癌症的治疗中存在着巨大潜力。肺癌是全球发病率和死亡率均居第一位的癌症。目前,针对肺癌的治疗手段主要有手术治疗,化疗及放疗等。但治疗的效果还有待进一步提高。随着纳米技术的飞速发展,基于新型纳米技术的肿瘤靶向性治疗成为了癌症治疗的热点研究领域。本研究设计并合成了一种基于鱼精蛋白修饰的纳米金刚石的功能性复合纳米材料作为miRNA的运载载体并通过化学合成的方式,将核酸适配体Mucin1(MUC-1Aptamer)末端带有的巯基与miR-34a末端带有的氨基通过交联剂形成二硫键构建了aptamer-mi RNA嵌合体;在此基础上,通过静电相互作用,将带负电荷的aptamer-miRNA嵌合体吸附于阳离子性纳米金刚石载体,构成aptamer-miRNA嵌合体-鱼精蛋白修饰纳米金刚石三元复合纳米载体(aptamer-miRNA chimeras on protamine functioned nanodiamonds,AMNPs)。从而希望实现miR-34a的纳米包载及基于MUC-1适配体的肺癌细胞的靶向递送。实验结果显示MUC-1适配器可以有效提高纳米药物向肺癌细胞中递送的靶向效率,并将miR-34a高效递送到肺癌细胞中。mi R-34a是一个在包括肺癌在内的多种癌症中表达均显著降低的miRNA。在癌症细胞中高表达miR-34a可有效抑制癌症细胞的生长,迁移和致瘤性。本研究发现miR-34a可以有效地被基于纳米金刚石的纳米靶向载体递送到非小细胞肺癌细胞中。进一步的研究显示miR-34a的高效递送不仅有效抑制了肺癌细胞的迁移,促进其凋亡,还显著降低了SirT1基因的表达。实验结果提示靶向纳米载体介导的miR-34a向肺癌细胞中的递送通过抑制SirT1基因的表达抑制肺癌细胞的迁移并促进其凋亡。本研究为寻求基于纳米技术的肺癌治疗新技术进行了有益地探索。