【摘 要】
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前言肾小球系膜细胞(GMC)是肾小球内最活跃的固有细胞,系膜细胞增生是多种原发性及继发性肾小球疾病中最常见的病理变化之一,它在肾小球硬化、纤维化的发生和发展中起重要作用。
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前言肾小球系膜细胞(GMC)是肾小球内最活跃的固有细胞,系膜细胞增生是多种原发性及继发性肾小球疾病中最常见的病理变化之一,它在肾小球硬化、纤维化的发生和发展中起重要作用。转化生长因子β1(TGF-β1)在肾内的过分表达可刺激系膜细胞的增生,同时它是肾脏细胞外基质(ECM)合成和纤维化的决定性介质,最后促使发生肾小球硬化。体外培养的系膜细胞和刚分离的肾小球均可表达过氧化物酶体增殖体激活受体(PPARγ),研究还证实PPARγ配基可呈剂量依赖性方式抑制系膜细胞增生,即PPARγ激活可逆转系膜细胞表型转化,降低ECM生成。目的本研究拟通过研究不同钙拮抗剂(CA)在不同浓度下对系膜细胞的TGF-β1和PPARγ表达的影响,初步探讨钙拮抗剂抑制系膜细胞增殖的机制。材料与方法1、在无菌室中进行大鼠GMC的复苏,传代,培养。2、无菌室内取生长良好的第四代GMC,接种于六孔板,加盖玻片。24小时后GMC长满玻片,换成无血清培养液继续培养24小时后分别加入佩尔地平或维拉帕米,各自浓度分别为10-4mmol/L、10-5mmol/L和10-6mmol/L,共12个孔,另外2个对照孔不加药,继续培养24小时。3、无菌室外依照说明书对玻片进行SABC免疫组化染色。4、应用计算机图象分析系统通过显微镜检查TGF-β1和PPARγ的半定量表达。结果1、对于TGF-β1组,维拉帕米和佩尔地平浓度越大,则含量越少;对于PPARγ组,维拉帕米和佩尔地平浓度越大,则含量越多;2、同一浓度维拉帕米和佩尔地平作用下,实验组的TGF-β1含量显著低于对照组(P<0.05);3、同一浓度维拉帕米和佩尔地平作用下,实验组的PPARγ含量显著高于对照组(P<0.05);4、相同浓度下,维拉帕米和佩尔地平之间的TGF-β1和PPARγ含量无明显差异(P>0.05);5、在不同浓度下,维拉帕米和佩尔地平对TGF-β1和PPARγ在GMC表达的影响呈剂量依赖性趋势。(P<0.05)结论1、维拉帕米和佩尔地平对大鼠GMC的TGFβ1表达有抑制作用,而对PPARγ有促进作用,提示其对GMC的增殖有抑制作用。(P<0.05)2、维拉帕米和佩尔地平对大鼠GMC的TGF-β1和PPARγ表达的影响无明显差异,提示二者对GMC增殖有相似的的抑制作用。(P>0.05)3、维拉帕米和佩尔地平对大鼠GMC的TGF-β1和PPARγ表达的影响与浓度有相关趋势,提示对GMC增殖的抑制作用与浓度有相关趋势。(P<0.05)
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