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卵巢癌是生殖系统中最常见的恶性肿瘤之一,也是妇科癌症死亡的主要原因。大多数卵巢癌患者接受辅助化疗或新型辅助化疗,化疗耐药性是导致生存率低的重要原因。铂类药物是卵巢癌化疗的基本药物之一,可通过与DNA交联,使双螺旋变性,共价结合DNA碱基对,使DNA功能障碍而抑制DNA合成。研究表明,一些基因间长链非编码RNA可能参与卵巢癌顺铂耐药的发生,但其具体机制有待进一步研究。 第一部分:H19和EMT相关蛋白在卵巢癌标本和正常卵巢组织中表达情况 目的:研究H19和EMT相关蛋白在卵巢癌组织和正常卵巢组织中的表达差异。 方法:选取卵巢癌组织上皮标本50例及正常卵巢组织标本50例,通过荧光定量QPCR技术测定其H19表达水平,通过荧光定量QPCR和石蜡切片免疫组化技术测定EMT相关蛋白表达情况,并与正常卵巢上皮细胞作对照。 结果:与正常对照相比,临床卵巢癌组织标本中,H19表达量显著较高,而E-cadherin表达量显著偏低,TWIST1、Snail和Slug表达量显著偏高。 结论:H19和EMT相关蛋白在卵巢癌组织和正常卵巢组织中的表达有显著差异,H19的作用可能是通过对EMT相关蛋白表达水平的调节来实现的。 第二部分:H19和EMT相关蛋白在多种卵巢癌细胞株和正常卵巢上皮细胞中的表达情况 目的:研究卵巢癌细胞株和正常卵巢上皮细胞的H19和EMT相关蛋白表达差异。 方法:选取多个卵巢癌细胞株与正常卵巢上皮细胞,通过荧光定量QPCR和Western blot方法检测H19和4个EMT相关蛋白的转录水平。 结果:与正常卵巢上皮细胞相比,卵巢癌细胞系H19转录水平明显较高,E-cadherin转录水平较低,而TWIST1、Snail和Slug转录水平明显较高。 结论:H19和EMT相关蛋白的转录水平在卵巢癌细胞和正常卵巢上皮细胞中存在显著差异。 第三部分:H19与EMT相关蛋白的关系研究及其在顺铂耐药中的作用 目的:构建H19敲减的稳转卵巢癌细胞株及卵巢癌顺铂耐药细胞株,研究H19表达与EMT相关蛋白的关系。 方法:构建H19敲减质粒,通过三质粒系统包装慢病毒并感染卵巢癌细胞系和卵巢癌顺铂耐药细胞系,通过荧光定量qPCR方法检测H19及EMT相关蛋白的表达变化。 结果:H19敲减细胞株与野生型卵巢癌细胞株相比,E-cadherin表达量显著上升,而TWIST1、Snail和Slug蛋白表达水平显著下降。H19敲减卵巢癌顺铂耐药细胞株与野生型卵巢癌顺铂耐药细胞株相比,E-cadherin表达量显著上升,而TWIST1、Snail和Slug蛋白表达水平显著下降。 结论:H19表达水平与EMT相关蛋白表达量存在明显相关关系,H19可能对EMT蛋白有调节作用,并以此参与卵巢癌顺铂耐药的产生。这对于加深对顺铂耐药机制的进一步理解,提升临床化疗效果有一定理论和实践意义。