果蝇LRRK2基因编码蛋白的纯化和抗体的初步检测

来源 :中南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sfish001
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是一种常见于中老年人的进行性神经变性疾病。其主要临床表现为静止性震颤、运动迟缓、肌强直和姿势反射障碍。大部分帕金森病是散发性的。随着α-synuclein、parkin、PINK1、LRRK2等6个PD相关致病基因的克隆,遗传因素在PD发病机制中的作用越来越受到关注。在大约2-13%的迟发型常染色体显性遗传的帕金森病患者和0.5-3%的散发帕金森病患者中检测到LRRK2基因的突变,因此该基因的发现具有重大的意义。果蝇作为研究帕金森病的动物模型,其基因组中含有5个已克隆的PD相关基因。果蝇中有复杂的神经系统,且神经生长和功能在细胞生物学和分子生物学上与人类有极大的相似性。这就使得果蝇成为研究神经生长,功能和神经机能障碍的重要模型。 目的:为了能够深入了解LRRK2基因的功能,了解其在PD发病机制中所起的作用,本实验原核表达和纯化了果蝇LRRK2基因编码的截短蛋白,经诱导并纯化后免疫新西兰雄兔,制备多克隆抗体。 方法:应用PCR的方法从果蝇gDNA中扩增部分LRRK2基因,构建至原核表达载体中,IPTG诱导后分离纯化表达产物并免疫新西兰雄兔,制备抗果蝇LRRK2基因编码蛋白的血清。构建pEGFP-N1-dLRRK2真核表达载体,转染HEK 293T细胞,通过荧光显微镜及Western blotting检测抗体的特异性。 结果:成功构建pGEX-4T-2-dLRRK2原核表达载体。得到了高表达的目的蛋白,经纯化后得到高纯度的GST-dLRRK2融合蛋白。免疫后血清经免疫印迹检测并初步证实了抗体的特异性。 结论:获得了纯化的重组dLRRK2蛋白及多克隆抗体,为在果.蝇模型中研究LRRK2基因的功能奠定了一定的基础。
其他文献
Peter Ford(彼得·福特),英国人,皇家西英格兰研究院副院长,布里斯托偏心美术馆(Off-Centre Gallery)主任,在全世界共组织策划了60余次纸上艺术品展览,是当今国际版画领域极
背景:基因治疗是指通过一定的方法将外源DNA分子导入病人体细胞并有效表达,从而纠正缺陷性状和表型,达到治疗疾病的目的。目前应用于基因治疗的的载体主要包括病毒载体和非病毒
为理解异翅亚目昆虫的线粒体基因组结构和序列进化提供重要线索和数据,也为用线粒体基因组序列大规模地研究异翅亚目高级阶元之间的系统发育关系奠定基础,在本项工作中,测定、注
学位
学位
蛋白适当的亚细胞定位是其发挥相应功能的前提,蛋白定位发生异常,将会对细胞功能甚至生命产生影响。酪蛋白激酶-2相互作用蛋白-1(casein kinase 2 interacting protein-1,CKIP-1
AcMNPV(Autographa californica multinucleocapsid NPV)被广泛的应用于外源基因的表达,它依据高效率的同源重组能力将外源基因插入到基因组中。尽管杆状病毒的同源重组被多次的
请下载后查看,本文暂不支持在线获取查看简介。 Please download to view, this article does not support online access to view profile.
期刊
超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,简称SOD)是一种金属酶类,它可分为四类,分别是Cu/Zn-SOD,Mn-SOD,Fe-SOD和Ni-SOD。SOD是一种重要的氧自由基清除剂,能催化超氧阴离子(O2·-)的歧化
学位
脯氨酸内肽酶(Prolyl endopeptidase,PEP)属于丝氨酸蛋白酶家族中的一种特殊的切割多肽链中脯氨酸残基羧基端的内切酶,广泛存在于动物、植物和微生物等生物体内。PEP参与生物
我的人格理想是:思想深刻、淡泊名利。但我还没有做到。《艺术沙龙》:艺术创作对您的出版事业有什么作用和影响吗?程大利:我从1979年从事编辑工作以来,有将近30年的历史,但一