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目的我国滥用兽药现象较为普遍,使得兽药残留对人体的健康产生了巨大的威胁。因此,本文针对氯霉素(chloramphenicol,CAP)、己烯雌酚(diethylstilbestrol,DES)、盐酸克伦特罗(clenbuterol hydrochloride,CL)等常用兽药,建立传统酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assays,ELISA),从而实现兽药残留快速检测技术。以荧光纳米粒子(Quantum dots,QDs)检测探针与金属纳米粒子(Gold nanoparticles,AUNPs)为依托,利用荧光共振能量转移(Flurescence resonance energy transfer,FRET),建立高选择性的痕量靶标物定量检测技术。在目标物分子存在时,竞争与荧光纳米探针结合,减弱了QDs与AU的结合,并阻碍了荧光共振能量转移的过程,恢复荧光,进而通过测定荧光强度的变化计算目标物的含量。方法利用活性酯法合成包被抗原,采用紫外全波长扫描、凝胶电泳等方法进行鉴定,对ELISA方法的反应条件进行了系统优化,确定了最佳的反应条件并计算灵敏度与准确度。将荧光纳米粒子和金属纳米粒子分别与生物抗体进行偶联,制备出两种纳米功能探针,并进行了活性鉴定与荧光强度的鉴定。优化反应条件,探究了添加不同浓度的目标物时在全波长扫描时的荧光强度变化,进而应用于胰岛素的检测应用。结果通过活性酯法合成的包被原BSA-CAP经过紫外全波长扫描、凝胶电泳初步验证偶联成功;BSA-DES、BSA-CL经紫外全波长扫描验证偶联成功。对间接竞争ELISA法的条件进行了优化,确定了最佳的反应条件,最佳包被液为0.01M,p H=9的碳酸盐缓冲液;封闭液选择酪蛋白,封闭体积为120μL且封闭时间90min;四甲基联苯胺(tetramethylbenzidine,TMB)和过氧化氢尿素的最佳浓度为1g/m L和0.3g/m L。CAP在0-10000ng/m L,R2=0.991,IC50=11.65ng/m L,LOD=0.415ng/m L,DES和C L在0-1000ng/m L范围内检测分别为,R2=0.991,IC50=0.7405ng/m L,LOD=0.348ng/m L,R2=0.9965,IC50=0.9629ng/m L,LOD=0.357ng/m L,具有较高的检测灵敏度。最终确定荧光纳米探针的制备方法,活化过程只添加活化剂1-3-二甲氨基丙基-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(1-ethyl-3-dimethylaminopropyl carbodiimide,EDC),浓度为5mg/m L、稀释液配方为0.5%BSA、0.3%聚乙二醇(Polyethylene glycol,PEG);制备了抗体、人白蛋白、胰岛素与DES的纳米探针,四种探针分别有生物活性和荧光强度;抗体的荧光纳米探针、胰岛素的荧光纳米探针在添加不同浓度的竞争物时的荧光强度变化有趋势。结论本研究成功地建立了三种典型兽药残留的ELISA检测方法,并表现出较高的检测灵敏度、特异性和稳定性。另外,利用活性酯法成功地制备出两种纳米功能探针,此类探针具有高度选择性和灵敏度,尤其适用于复杂基质中痕量组分分析结合分子识别元件。将这两种纳功能探针应用于胰岛素检测中,得到了较好的检测结果,为后续的兽药残留检测研究奠定了一定的基础。