论文部分内容阅读
本研究以榛属植物为研究对象，目的是分离鉴定具有生物活性内生真菌，对其粗提物的活性分析并初步纯化、优化发酵培养基以提高其生物活性。从榛子树皮中分离获得到8株内生真菌，经形态学鉴定，初步鉴定为2株青霉属(Penicillium)、1株链孢霉属(Fusarium)、1株脉孢菌属(Neurospora)、1株赤霉属(Gibberella)、1株枝孢属(Cladosporium)、1株肉座菌属(Hypocrea)、1株Paraphaeosphaeria属。就分离得到的内生真菌发酵培养，对其产物进行活性筛选，以DPPH清除率、FRAP值为指标，综合总抗氧化能力测定结果，筛选到1株抗氧化活性菌株JTLR-1，经鉴定为Penicillium sp。综合6种抗氧化能力测定方法对JTLR-1菌株抗氧化活性进行分析，分别研究了JTLR-1菌株发酵液提取物清除DPPH、羟自由基、氧自由基能力、总抗氧化能力和还原能力，以及抑制亚油酸过氧化能力，并以Vc、BHT为对照。结果表明，JTLR-1菌株发酵液提取物对DPPH、羟自由基、氧自由基具有一定的清除作用，同时表现出一定的总抗氧化能力和还原能力以及抑制亚油酸过氧化能力。JTLR-1菌株发酵液提取物抗氧化能力与浓度体现出一定的量效关系，随着浓度的升高，抗氧化活性增强。与对照品BHT、Vc相比，清除羟自由基能力、还原力、总抗氧化能力、清除氧自由基能力、均高于BHT,低于Vc；抑制亚油酸体系过氧化能力均高于BHT和Vc，DPPH清除率与BHT、Vc相近。JTLR-1菌株发酵液提取物中总酚含量为1.8520.02%，总黄酮含量为1.960.01%。相关性研究表明，JTLR-1菌株发酵液提取物抗氧化能力与总酚总黄酮有着显著的相关性。不同抗氧化方法之间也有较好的相关性。JTLR-1菌株发酵提取物经硅胶柱层析可将有效活性物质与杂质粗分离，获得了两组较高抗氧化活性的馏分，分别是馏分5（乙酸乙酯：乙醇=5:2），馏分6(乙酸乙酯：乙醇=5:1)。清除DPPH自由基试验表明， IC50分别为1.05±0.11mg/mL、0.99±0.09mg/mL，纯化后馏分6的清除率可达84.40±2.56%。本研究探讨了营养成分对抗氧化物质产生的影响，以获得抗氧化成分最佳的发酵条件，综合运用单因子试验，PB试验设计及RMS法得出，适合JTLR-1菌株产生抗氧化活性成分的培养基组成为：葡萄糖30g/L，蛋白胨3g/L，硝酸铜0.318mg/L，硫酸锌0.631mg/L，硫酸亚铁0.1864mg/L。以此条件下验证试验得到抗氧化能力的IC50值为0.810mg/L。