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目的:胰腺癌是世界上死亡率较高的恶性肿瘤之一。由于胰腺癌特殊的解剖结构,其在确诊时大多已侵犯周围血管,造成病人手术根治率低下,5年生存率始终保持在8%左右。在胰腺癌细胞增殖及血管侵犯的过程中,肿瘤异常微血管的生成十分重要,而肿瘤微血管的产生则依赖于VEGF等促血管生成因子。因此,深入探究胰腺癌肿瘤微血管生成的作用机制及其相关分子通路在抑制胰腺癌局部血管浸润,提高手术可切除率和病人根治率方面具有十分重要的意义。本实验旨在利用质粒转染的方法改变人胰腺癌细胞株Patu8988和Capan-2中L1CAM及α5-整合素的表达,检测促血管生成因子STAT3、pSTAT3、VEGF-A以及Ang-2表达情况,并进一步探究质粒转染后人胰腺癌细胞株上清液对体外人脐静脉内皮细胞小管形成的影响。初步探讨L1CAM与α5-整合素在胰腺癌肿瘤微血管生成中所起到的作用。研究方法:本研究选取Patu8988和Capan-2人胰腺癌细胞株作为体外实验对象。将上述两种人胰腺癌细胞株分别分成三组:空白组、对照组及实验组。在上调L1CAM表达的实验中,空白组不进行质粒转染,对照组瞬时转染质粒pcDNA3.1,实验组瞬时转染重组质粒pcDNA3.1-L1CAM;在抑制α5-整合素表达的实验中,空白组不进行质粒转染,对照组瞬时转染空白si RNA,实验组瞬时转染α5-整合素siRNA。利用实时定量PCR和western blot在质粒转染后分别检测空白组、对照组和实验组Patu8988及Capan-2胰腺癌细胞株中L1CAM与α5-整合素的m RNA和蛋白表达情况以及促血管生成因子STAT3、pSTAT3、VEGF-A、Ang-2的m RNA和蛋白表达情况。人脐静脉内皮细胞体外小管生成实验检测L1CAM及α5-整合素表达水平变化后Patu8988和Capan-2胰腺癌细胞株上清液对HUVEC细胞体外小管生成的影响,用来模拟体内微血管形成。结果:1、上调Patu8988胰腺癌细胞中L1CAM的表达,qPCR检测结果显示,实验组L1CAM、STAT3、Ang-2及VEGF-A mRNA相对表达水平分别为1.7385±0.0763、1.4984±0.0404、1.2864±0.0282、3.8413±0.1345。Western检测结果显示,实验组L1CAM、VEGF-A、Ang-2、pSTAT3、STAT3蛋白相对表达水平分别为2.7104±0.1734、2.1100±0.1099、2.4451±0.2384、4.247±0.2895、1.0145±0.0168。人脐静脉内皮细胞中实验组完整小管形成的相对总长度为1.35±0.06。另外在Capan-2胰腺癌细胞中,实验组L1CAM、STAT3、Ang-2及VEGF-A m RNA相对表达水平分别为1.6348±0.0965、1.2195±0.0256、2.2987±0.3505、3.9340±0.2409。实验组L1CAM、VEGF-A、Ang-2、pSTAT3及STAT3、蛋白相对表达水平分别为2.4932±0.2985、2.1515±0.1222、3.2373±0.3323、2.0736±0.2755、1.0217±0.0874。人脐静脉内皮细胞中实验组完整小管形成的相对总长度为1.31±0.05。2、抑制Patu8988胰腺癌细胞中的α5-整合素的表达,qPCR检测结果显示,实验组α5-整合素、STAT3、Ang-2及VEGF-A mRNA相对表达水平分别为0.4922±0.0754、0.7194±0.0710、0.4779±0.0748、0.3018±0.0776。Western检测结果显示,实验组α5-整合素、VEGF-A、Ang-2、pSTAT3、STAT3蛋白相对表达水平分别为0.3478±0.0264、0.4237±0.0186、0.2740±0.0291、0.5699±0.0432、0.9637±0.0397。人脐静脉内皮细胞中实验组完整小管形成的相对总长度为0.79±0.07。另外在Capan-2胰腺癌细胞中,实验组α5-整合素、STAT3、Ang-2及VEGF-A mRNA相对表达水平分别为0.5425±0.3061、05802±0.0033、0.5649±0.0555、0.3065±0.0459。实验组α5-整合素、VEGF-A、Ang-2、pSTAT3及STAT3蛋白相对表达水平分别为0.4392±0.0286、0.6896±0.0312、0.4698±0.0365、0.3554±0.0304、1.0146±0.0276。人脐静脉内皮细胞中实验组完整小管形成的相对总长度为0.73±0.08。上述各项相对表达水平,除western实验中STAT3蛋白相对表达水平无显著性差异,余均具有统计学显著性差异(P<0.05)。结论:在体外培养人胰腺癌细胞株中,L1CAM表达水平增加显著提高促血管生成因子分泌,增强体外小管生成能力;而α5-整合素表达水平下调能够显著抑制促血管生成因子分泌,削弱血管生成能力。