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糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)是糖尿病的常见微血管并发症,是引起终末期肾衰(End-stage renal damage ESRD)的主要原因之一。近年来,全球DN发病率逐年增加,DN使糖尿病患者预后恶化、医疗费用大幅增加。目前针对DN的治疗并不能完全阻断其病情进展,深入研究DN的发病机制以寻找新的治疗靶点,对于DN患者治疗及预后有重要影响,同时也带来巨大的经济效益和社会效益。DN的发病机制非常复杂,糖脂代谢紊乱、肾脏血流动力学改变、氧化应激、多种细胞因子及遗传背景均起重要作用。近年研究发现这些机制都与炎症有着千丝万缕的联系,炎症发病机制为DN治疗提供了新思路。目前发现部分免疫抑制剂能通过其抗炎作用保护肾脏,其作用独立于通过改善代谢或血流动力学的传统治疗方法。但这些研究仅停留于动物实验阶段,针对慢性炎症治疗改善DN预后的基础与临床研究,尚不够清晰明朗。DN是一种自然免疫和低水平的炎症性疾病,炎症在DN的进展过程中起重要作用。促炎症因子与抗炎症因子的失衡决定肾脏病的转归。临床研究证实,促炎症因子IL-6、TNF-α与DN发病关系密切,并可对DN进展早期预测;IL-10具有抗炎和免疫抑制作用,与DN的发病密切相关,但其作用仍有争议。DN临床表现多样,病机复杂多变。有关炎症因子与DN证候的相关性鲜有报道,探讨炎症因子与糖尿病肾病中医证候的相关性,并赋予中医证候现代生物学涵义具有实践意义。导师王耀献教授将中医整体辨证与肾脏微观辨证相结合,丰富和完善DN“微型癥瘕”学说,将其发展形成一个完整的理论体系—肾络癥瘕理论体系,提出其核心病机为肾络聚散消长失衡。以肾络癥瘕理论为指导开展了中医药治疗糖尿病肾病的实验及临床研究,取得很好疗效。本课题实验部分以肾炎防衰液为代表方剂,探索肾炎防衰液对DN炎症发病机制的干预作用。目的:1.以聚散失衡病机为切入点,探讨炎症因子与糖尿病肾病中医证候之间的相关性。2.利用2型糖尿病肾病大鼠模型,观察肾炎防衰液对TNF-α/NF-κB炎症信号通路,及氧化应激和细胞外基质集聚的影响;研究肾炎防衰液对糖尿病肾病炎症发病机制的干预作用。方法:1.临床研究:采集糖尿病、糖尿病肾病Ⅲ期(DNⅢ),糖尿病肾病Ⅳ期早期(DNⅣ血肌酐正常)患者的中医证候学资料,并留取血清,分析促炎症因子IL-6、TNF-α与标实证、抗炎症因子IL-10与本虚证之间的相关性,及IL-6/IL-10比值变化与聚散消长失衡病机的相关性。2.实验研究:采用单侧肾切除+高脂饲料喂养+STZ腹腔注射“三联”造模方法,诱导2型DN动物模型。实验大鼠分为4组,分别为空白对照组、模型对照组、肾炎防衰液组及厄贝沙坦组。糖尿病大鼠成模后给药8周,检测大鼠体重、血糖、24h蛋白尿、肾重/体重比值、血清总蛋白、血清白蛋白、总胆固醇、甘油三酯、血清肌酐、血清尿素氮、血清丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD);肾脏病理切片行HE及PAS染色,观察肾脏病理改变;免疫组化法检测肾组织TNF-α、NF-κBp65、TGF-β1和ColⅣ表达;实时荧光定量 PCR 法检测肾组织 NADPHp22phox、TNF-α、NF-KBp65、TGF-β1mRNA表达。结果:一、临床研究:1.早期DN患者血清炎症因子IL-6、TNF-α升高(与正常组相比P<0.05),IL-6、TNF-α可能作为DN早期肾损伤的标志物。2.早期DN患者标实证以湿热证为主(34.07%),湿热、痰浊、血瘀证伴IL-6、TNF-α高表达(与气滞证相比P<0.05);本虚证以气阴两虚型为主(45.88%),IL-10血清浓度随DN病机进展而逐渐减低(P<0.05)。3.IL-6/IL-10比值升高反应促炎/抗炎的失衡,IL-6/IL-10比值随DN病情进展逐渐升高(P<0.05)。二、实验研究:1.肾炎防衰液可以降低模型组血脂(P<0.05),减少蛋白尿排泄(P<0.01),减轻肾脏病理损伤(P<0.01)。2.肾炎防衰液可以减少模型组MDA产生(P<0.01),升高SOD含量(P<0.01),降低肾脏p22phoxmRNA的表达(P<0.05),从而减轻氧化应激,增加抗氧化能力。3.肾炎防衰液可以抑制模型组TNF-α、NF-κBP65表达(P<0.05),减轻肾脏炎症反应。4.肾炎防衰液可以降低模型组TGF-β1表达(P<0.05),抑制ColⅣ产生(P<0.05),从而减轻ECM积聚。结论:(1)早期DN患者血清炎症因子IL-6、TNF-α高表达;湿热、痰浊、血瘀证呈现出IL-6、TNF-α高表达;IL-6/IL-10比值升高反应促炎/抗炎的失衡,是聚散失衡病机理论的微观体现,IL-6/IL-10比值升高可能预测DN病情进展。(2)肾炎防衰液可以降低血脂,减少尿蛋白排泄,减轻肾脏病理损伤。其作用机制可能与抑制TNF-α/NF-κB炎症信号通路,改变氧化应激状态、下调炎性细胞因子表达有关。由此验证了炎症是DN的重要发病机制,肾络癥瘕理论对DN治疗具有重要指导意义。