糖皮质激素对TGF-β1所致肺纤维化的影响

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目的:体外研究糖皮质激素对TGF-β1所致肺纤维化的影响。方法:本研究主要通过转化生长因子β1(TGF-β1)诱导肺泡II型上皮细胞系A549发生上皮间质转化(EMT)构建肺纤维化模型,通过real-time PCR方法筛选适宜的TGF-β1浓度,同时观察该浓度作用下细胞形态学变化,并采用Western blot检测相关蛋白的表达。然后分别于TGF-β1刺激A549 24h或48h后予以10-8M、10-7M、10-6M、10-5M、、10-4M等浓度地塞米松(Dex)干预,采用Western blot检测E-cadherin(E-cad)、α-SMA、fibronectin的表达情况。结果:2ng/ml TGF-β1可以使A549发生形态学改变,通过real-time PCR检测发现TGF-β1刺激A549后,上皮细胞标志物E-cad mRNA表达下降、间质细胞标志物Collagen I mRNA和Vimentin mRNA表达增加,α-SMA mRNA呈降低表现;显微镜下观察细胞形态由原来的鹅卵石样变成纺锤体样,细胞间连接减少,且随着时间的延长细胞形态学改变越明显;Western blot检测发现上皮细胞标志物E-cad表达下降、间质细胞标志物fibronectin表达增高,α-SMA无明显变化。而予以不同浓度Dex干预对TGF-β1所致上皮细胞E-cad的降低无明显改善,且低浓度情况下有促进fibronectin表达的作用,较早予以高浓度Dex可能会减轻fibronectin的表达。结论:2ng/ml TGF-β1可以诱导A549产生EMT,且随着时间的延长细胞形态及蛋白表达差异越明显。而不同浓度Dex对TGF-β1所致肺纤维无明显改善作用,且低浓度的Dex能促进EMT的加重,较早予以高浓度Dex可能会减轻EMT细胞外基质的产生。
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