狂犬病是由狂犬病病毒引起的人兽共患病，人和所有的温血动物都易感。被带毒动物咬伤后如不进行及时治疗而一旦发病，病死率几乎100％。我国人狂犬病病例攀居世界第二，家养犬是我国狂犬病的重要传播宿主，95％的人狂犬病病例是由犬咬伤所导致，50％—70％的狂犬病病例发生在农村。最主要的原因是缺少安全有效、价格低廉、使用方便的动物狂犬病疫苗，因此，研制开发高效、安全、免疫方便的兽用狂犬病灭活疫苗，从根本上预防和控制我国狂犬病，特别是农村地区的狂犬病有着重要的现实意义。 本试验所使用的疫苗株为利用反向遗传操作系统拯救获得的携带双G基因的重组狂犬病病毒HEP—Flury(dG)株，用BHK—21细胞大量增殖双G狂犬病病毒，以直接免疫荧光实验测定其病毒滴度和鉴定。将所获得病毒处理后用1/4000的BPL(β—丙内酯)进行灭活。将灭活后的病毒分别接种1周龄内的乳鼠和BHK—21细胞，检测灭活剂的灭活效果。灭活后的病毒颗粒经无菌检验后，选用铝佐剂、蜂胶和油佐剂三种佐剂制成三种狂犬病灭活疫苗，进行小鼠免疫试验。试验表明，油佐剂和蜂胶佐剂狂犬病灭活疫苗免疫组效价较高。蜂胶狂犬病灭活疫苗二次免疫产生的抗体水平明显高于一免，油佐剂狂犬病灭活疫苗一免抗体水平与蜂胶狂犬病灭活疫苗二免产生的抗体水平相当。携带双G基因的狂犬病病毒HEP—Flury(dG)株具有良好的免疫原性，油佐剂是作为该狂犬病病毒株的最适佐剂。 为改进疫苗质量，本研究制备抗原与佐剂3种比例的狂犬病油乳剂灭活疫苗，免疫18—22gSPF昆明小鼠并与某商品化疫苗进行对比试验，确定抗原与佐剂的最佳配比；通过对病毒进行不同倍数的稀释后，再将灭活后的病毒液与佐剂以2：3的比例制成疫苗，免疫3月龄以上犬，进行狂犬病抗体检测。结果表明，1:1和2：3两种配比的疫苗能较早产生有效保护性抗体水平，抗原滴度只需达到107 FFU/mL即可使3月龄以上的犬在免疫14d产生抵抗强毒攻击的有效抗体水平。 为了探求一种简便、快速、特异、敏感的狂犬病抗体检测方法，本研究利用酶联免疫吸附试验(ELISA)与细胞培养病毒中和试验(FAVA)两种方法检测狂犬病疫苗免疫后血清抗体。将40只犬免疫兽用狂犬病疫苗后第14d静脉采血分离血清，分别采用ELISA法和国际贸易指定试验FAVA法检测血清样品，试验犬免疫第21d攻击狂犬病病毒街毒BD06株。结果表明，两种方法检测结果差异不显著(P≥0.05，P=0.19)，FAVN、ELISA法检测狂犬病抗体与攻毒试验结果的阳性符合率都为100％。 为了阐明制备疫苗的免疫效果，用检定合格的狂犬病油乳剂灭活疫苗，进行动物免疫试验，与市售狂犬病灭活疫苗的免疫效果进行比较。在本试验中，用ELISA方法对疫苗免疫后的犬血清进行了检测和对灭活疫苗进行NIH效力试验。结果表明，用HEP—Flury(dG)株制备的疫苗免疫1次后可诱导犬产生高水平的狂犬病抗体，且疫苗免疫12个月后抗体仍维持较高水平，而市售狂犬病灭活疫苗的试验犬免疫12个月后平均抗体水平低于试剂盒阳性标准值0.6EU/mL；疫苗免疫第12个月，试验犬抗体阳性率为80.95％，而市售狂犬病灭活疫苗的免疫犬抗体阳性率为40％；疫苗经NIH法测试疫苗效价大于2.5IU，该狂犬病灭活疫苗接种受试动物后，均无不良反应，疫苗安全性好。