【摘 要】
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目的:研究锌指蛋白ZFX在人慢性髓细胞白血病(CML)干/祖细胞中的表达和功能。方法:(1)收集正常供体和CML患者骨髓,密度梯度离心、免疫磁珠富集及流式分选分别得到单个核细胞、
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目的:研究锌指蛋白ZFX在人慢性髓细胞白血病(CML)干/祖细胞中的表达和功能。方法:(1)收集正常供体和CML患者骨髓,密度梯度离心、免疫磁珠富集及流式分选分别得到单个核细胞、CD34+细胞及CD34+静息期细胞,qRT-PCR法检测ZFX表达水平;(2)利用慢病毒载体沉默ZFX表达,通过细胞增殖和集落生成检测ZFX沉默对正常骨髓和CML患者CD34+细胞生长等的影响;(3)伊马替尼(Imatinib mesylate,IM)与靶向ZFX共同处理CML患者CD34+细胞,研究靶向ZFX对药物敏感性的影响;(4)IM处理CML患者CD34+细胞和K562细胞,检测ZFX表达的变化,以探究BCR-ABL如何调控ZFX表达;(5)CML患者CD34+细胞中沉默ZFX表达,microarray分析ZFX沉默所引发的基因表达变化,探讨ZFX的作用机制。结果:(1)ZFX在健康供体CD34+细胞中表达高于成熟细胞,ZFX沉默抑制正常骨髓CD34+细胞的生长;(2)CML患者中ZFX的表达显著高于正常对照细胞;(3)ZFX沉默抑制CML患者CD34+细胞生长;(4)ZFX沉默增强患者CD34+细胞的IM敏感性;(5)IM处理能剂量依赖性地降低CML细胞中ZFX表达,与Caspase活性相关;(6)已建立对照与ZFX沉默CML患者CD34+细胞基因表达谱,为研究ZFX作用机制提供重要基础。结论:ZFX是人类造血发生的调控因子,其在CML细胞中异常高表达;ZFX沉默能抑制CML患者CD34+细胞的生长并增强其IM敏感性。
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