论文部分内容阅读
补阳还五汤是中医临床治疗缺血性中风的常用方剂,由七味中药:黄芪、当归、赤芍、红花、川芎、桃仁、地龙组成,本方具有“补气,活血,通络”之功效。本研究通过高效液相色谱法对补阳还五汤复方中的君药黄芪和佐药当归进行优质道地产区药材的筛选,利用曲面相应法确定最佳的补阳还五汤提取工艺,结合Fick扩散定律,建立了补阳还五汤中单味药的煎煮动力学模型,为补阳还五汤后续的深入研究奠定了基础。目的:运用高效液相色谱法筛选出最佳道地产区的黄芪和当归,利用曲面相应法确定最佳的补阳还五汤提取工艺,以Fick扩散定律为基础,建立出补阳还五汤中黄芪/当归的煎煮动力学模型。方法:1.优选出最佳的道地产区的黄芪分别购买了山东临朐、内蒙古集宁、甘肃岷县、内蒙古固阳、内蒙古赤峰、陕西子州、河北安国、河北唐山、甘肃陇西和甘肃野生10个产地的黄芪,采用高效液相色谱法对其含有的毛蕊异黄酮葡萄糖苷进行测定比较,色谱条件为:安捷伦C18柱(250mm×4.6mm,5β m);流动相为乙腈(A)-0.2%甲酸溶液(B),0～20min(20%～40%A),20～30min(40%A);流速:1ml/min;检测波长:260nm;进样量;10μl。2.优选出最佳的道地产区的当归分别购买了甘肃康乐、甘肃岷县、甘肃渭源、甘肃漳县、湖北恩施、湖北利川、四川九寨沟县、四川平武县、西藏朗县和青海乐都10个产地的当归,采用高效液相色谱法对其含有的阿魏酸和藁本内酯进行测定比较,阿魏酸色谱条件为:色谱柱:安捷伦C18柱(250mm×4.6mm,5 βm);流动相为乙腈(A)-0.085%磷酸溶液(B);流速:1ml/min;检测波长:316nm;柱温:35℃;进样量;10βl。确定的藁本内脂色谱条件为:色谱柱:安捷伦C18柱(250mm×4.6mm,5 μ m);流动相为甲醇-水-乙酸(75:24.8:0.2);流速:1ml/min;检测波长:326nm;柱温:30℃;进样量;10βl。3.建立补阳还五汤中主要有效成分的HPCL测定法以羟基红花黄色素A、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芍药苷和阿魏酸作为测定药液中成分含量的4个指标,建立补阳还五汤HPCL测定法,色谱柱:安捷伦C18柱(250mmX 4.6mm,5 u m);流动相为乙腈(A)-0.05%磷酸水溶液(B),采用梯度洗脱0～30min(5～20%A),30～60min(20～60%A),60～70min(60～90%A),70～80min(90%A);流速:1ml/min;检测波长:230nm;进样量;10μl。4.建立补阳还五汤中黄芪药材的煎煮动力学模型对黄芪主要有效成分毛蕊异黄酮葡萄糖苷在补阳还五汤中进行煎煮动力学的研究,建立煎煮动力学模型,以Fick扩散定律为基础,推算出方程参数,将测定结果代入数学1模型CB=[af1/σ1(M-R)t1/2]1/n-1进行方程拟合。a1(M-5.建立补阳还五汤中当归药材的煎煮动力学模型对当归主要有效成分阿魏酸在补阳还五汤中进行煎煮动力学的研究,建立煎煮动力学模型,以Fick扩散定律为基础,推算出方程参数,将测定结果代入数学模型CB=[af1/σ1(M-R)t1/2]1/n-1进行方程拟合。6.优选出最佳的补阳还五汤提取工艺以羟基红花黄色素A、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芍药苷和阿魏酸作为测定药液中成分含量的4个指标,色谱柱:安捷伦C18柱(250mm×4.6mm,5 β m);流动相为乙腈(A)-0.05%磷酸水溶液(B),采用梯度洗脱 0～30min(5～20%A),30～60min(20～60%A),60～70min(60～90%A),70～80min(90%A);流速:1ml/min;检测波长:230nm;进样量;10βl。采用Box-Bebnken试验设计,以提取溶剂次数、提取时间、提取溶剂倍数为自变量,采用3因素3水平的响应曲面法考察以上三种因素对复方提取工艺的影响,并且与补阳还五汤中黄苗/当归药材煎煮动力学相互结合优选最佳提取工艺。7.统计方法统计软件:Microsoft office 2016软件、Design-expert 8.0.6软件。统计方法运用于计量资料。结果:1.优选出最佳的道地产区的黄芪测定出10个产地黄芪的毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量,分别是:山东临朐(0.022%)、内蒙古集宁(0.051%)、甘肃岷县(0.061%)、内蒙古固阳(0.107%)、内蒙古赤峰(0.076%)、陕西子州(0.065%)、河北安国(0.054%)、河北唐山(0.070%)、甘肃陇西(0.090%)和甘肃野生(0.078%)。确定最优道地产区的黄芪为内蒙古固阳黄芪。2.优选出最佳的道地产区的当归测定出10个产地当归的阿魏酸含量,分别是:甘肃康乐(0.07%)、甘肃岷县(0.12%)、甘肃渭源(0.08%)、甘肃漳县(0.07%)、湖北恩施(0.09%)、湖北利川(0.09%)、四川九寨沟县(0.10%)、四川平武县(0.07%)、西藏朗县(0.10%)和青海乐都(0.09%)。测定出10个产地当归的藁本内酯含量,分别是:甘肃康乐(0.097%)、甘肃岷县(0.170%)、甘肃渭源(0.127%)、甘肃漳县(0.081%)、湖北恩施(0.141%)、湖北利川(0.105%)、四川九寨沟县(0.141%)、四川平武县(0.119%)、西藏朗县(0.165%)和青海乐都(0.142%)。确定最优道地产区的当归为甘肃岷县当归。3.建立补阳还五汤中主要有效成分的HPCL测定法方法学结果表明,该方法均符合要求,可用于补阳还五汤中羟基红花黄色素A、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、阿魏酸和芍药苷的测定。4.建立补阳还五汤中黄芪药材的煎煮动力学模型得出方程:CB=[0.7926/σ1(M-R)t1/2]1/-1.3542,研究所建立的动力学模型能较好地与试验结果相吻合,各条件下的试验数值与计算数值的标准偏差(0.3013%)基本能满足工业标准偏差要求(小于10%)。5.建立补阳还五汤中当归药材的煎煮动力学模型得出方程:CB=[0.3443/σ1(M-R)t1/2]1/1.2108,研究所建立的动力学模型能较好地与试验结果相吻合,各条件下的试验数值与计算数值的标准偏差(0.54%)基本能满足工业标准偏差要求(小于10%)。6.优选出最佳的补阳还五汤提取工艺利用Design Expert8.0.6软件对表试验数据进行二次拟合,得羟基红花黄色素A峰面积(R1)、毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰面积(R2)、芍药苷峰面积(R3)、阿魏酸峰面积(R4)对溶剂倍量(A)、提取时间(B)、提取次数(C)二次多项回归模型方程,将方程进行拟合最终确定补阳还五汤提取工艺为:8倍量水、每次60min,提取2次。结论:优选出了最佳的黄芪道地产区药材内蒙古固阳黄芪;优选出了最佳的当归道地产区药材甘肃岷县当归;确定了补阳还五汤最优的提取工艺:8倍量水、每次60min,提取2次;成功建立了补阳还五汤中黄芪药材的煎煮动力学模型:CB=[0.7926/σ1(M-R)t1/2]1/-1.3542;成功建立了补阳还五汤中当归药材的煎煮动力学模型:CB=[0.3443/σ1(M-R)t1/2]1/1.2108。