论文部分内容阅读
本文对汕头市桑浦山产马尾松针主要成分进行了分析，通过比较不同溶剂萃取浸膏的抑菌效果，确定了马尾松针有效活性成分，优化了其水提工艺。测定了水提液对嗜水气单胞菌的MIC/MBC。在抑制浓度≤MIC的条件下，测定其对嗜水气单胞菌膜通透性的影响及对外毒素、S层蛋白、总蛋白合成的影响，并在电镜下观察作用不同时间后嗜水气单胞菌生长形态的变化，以研究马尾松针水提液对嗜水气单胞菌的生长及毒力作用影响。 结果显示，马尾松针的含水率为53.81％，粗脂肪含量为8.99%，蛋白含量为7.32%，淀粉含量为4.40%。以蒸馏水、65%乙醇为溶剂提取马尾松针浸膏的提取率分别为29.5%和39.5%，抑菌圈直径分别为1.37cm和1.12cm，石油醚、氯仿、正丁醇、乙酸乙酯、蒸馏水为溶剂顺序萃取水提浸膏的浸提率依次为4.593%、1.113%、7.427%、2.602%、28.253%，抑菌圈大小乙酸乙酯部位>正丁醇部位>水溶性部位>石油醚部位>氯仿部位，说明溶于乙酸乙酯相的成分起到了主要的抑菌作用。水提与醇提抑制嗜水气单胞菌效果无显著差异，因此选用比较经济方便的蒸馏水为溶剂提取松针中有效物质进行抑菌试验。对马尾松针的水提取条件进行探索，确定本研究选择的松针提取条件为：提取温度为80℃，料液比1:20，提取时间1h，提取次数2次。 进一步研究马尾松针水提液对嗜水气单胞菌的抑菌作用，测定了其MIC、MBC值分别为8.4mg/ml和16.8mg/ml。在嗜水气单胞菌培养基中加入1/2MIC浓度的水提液，表现为迟缓期从第3h延长到第6h，第6-10h为对数期，10h后是稳定期。当加入药液量为MIC或MBC浓度时，嗜水气单胞菌完全被抑制。 加入马尾松针水提液后嗜水气单胞菌对卡那霉素的吸收增强，说明松针水提液增大了菌体细胞膜通透性。通过电镜观察细胞形态，发现嗜水气单胞菌在收到药物刺激后出现破损和溶解现象。在1/2MIC浓度的松针水提液作用下，嗜水气单胞菌总可溶性蛋白先下降后升高，在MIC浓度的松针水提液作用下则一直降低。同时，SDS-PAGE检测发现17kD、24kD、37kD、39kD和45kD的蛋白表达异常。在MIC浓度的松针水提液作用下，外毒素的表达上调，而外膜蛋白和S层蛋白表达下调。