背景:葡萄膜炎是一类常见的眼内炎症性疾病,主要累及葡萄膜,视网膜,视网膜血管及玻璃体,是我国重要的致盲眼病。Vogt-小柳原田综合征(Vogt-Koyanagi-Harada syndrome,VKH)和白塞氏病(Behcet’s disease,BD)是亚洲人群中两种常见的葡萄膜炎类型。VKH综合征是一种多系统受累的自身免疫性疾病,临床改变以双侧肉芽肿性全葡萄膜炎为特征,并伴有其他系统的损害,如白癜风,听力和神经系统受损等。Behcet病是一种自身炎症性疾病,临床表现以反复发生的葡萄膜炎,口腔溃疡,生殖器溃疡以及皮肤损害为特征。目前治疗葡萄膜炎的主要药物仍为糖皮质激素和免疫抑制剂。表观遗传修饰主要包括3种调节机制:DNA甲基化、组蛋白修饰和RNA相关沉默。DNA甲基化是表观遗传修饰的重要机制之一,其在不改变基因序列的情况下调控基因的功能,并能将此基因功能遗传给后代。已有研究表明DNA甲基化参与调控免疫反应以及T细胞亚群分化过程中细胞因子的表达。早期研究报道,在初始CD4+T细胞分化为Th1细胞时,IFN-γ表达上调与其启动子区甲基化水平降低有关,并且il-4表达沉默与gata3和il-4的甲基化密切相关。近年来,表观遗传学改变在自身免疫性疾病中的作用越来越受到大家的关注,一系列研究表明,t细胞dna甲基化的异常与某些自身免疫性疾病相关。虽然葡萄膜炎的发病机制目前还不完全清楚,但越来越多的研究表明t细胞介导的免疫反应在vkh综合征和behcet病的发病过程中发挥着重要作用。很多研究表明th1,th2,th17和treg细胞分泌的细胞因子表达异常以及这四种th细胞亚群的频率异常在葡萄膜炎发生中起重要作用。研究表明活动性vkh患者和bd患者体内ifn-γ,il-17a,tbx21,rorγt表达异常,提示t细胞亚群的免疫功能失调参与葡萄膜炎的发生发展。基于以上研究背景,我们提出以下问题:cd4+t细胞亚群的转录因子及炎症因子启动子区甲基化水平与vkh综合征和behcet病的发生是否存在相关性?第一部分cd4+t细胞亚群转录因子及炎症因子的dna甲基化水平在vogt-小柳原田综合征中的研究目的:在本研究中,我们探讨cd4+t细胞亚群的转录因子及炎症因子(tbx21,gata3,rorγt,foxp3,ifn-γ,il-4,il-17a和tgf-β)启动子区甲基化在vkh综合征的发生发展中的作用。方法:1.利用sequenommassarray系统检测vkh患者和健康对照cd4+t细胞亚群转录因子和炎症因子启动子区dna甲基化水平。2.利用荧光定量pcr(rt-pcr)技术检测vkh患者和健康对照cd4+t细胞中gata3,tgf-β和il-4mrna表达水平。3.利用相关性分析的方法,分析gata3,tgf-β和il-4启动子区dna甲基化水平与其相应的mrna表达的关系。结果:1.与正常对照相比,gata3,tgf-β和il-4基因启动子区甲基化水平在活动期vkh患者cd4+t细胞中中显著升高(p<0.05)。2.活动期vkh患者cd4+t细胞中gata3和tgf-β基因mrna表达水平显著降低,且与其相应的甲基化水平呈负相关关系。3.与活动期vkh患者相比,静止期vkh患者体内gata3和tgf-β基因启动子区甲基化水平显著降低且其mrna表达水平显著升高。结论:在本研究中,我们发现活动期vkh患者cd4+t细胞中gata3和tgf-β启动子区甲基化水平显著升高,影响其mrna表达水平下降,进而参与vkh综合征的发生发展。环孢素和激素的药物治疗可能通过降低vkh患者体内gata3和tgf-β启动子区甲基化水平,进而调节其mrna表达,从而达到治疗效果。第二部分cd4+t细胞亚群转录因子及炎症因子的dna甲基化水平在behcet病中的研究目的:为了探讨cd4+t细胞亚群的转录因子及炎症因子(tbx21,gata3,rorγt,foxp3,ifn-γ,il-4,il-17a和tgf-β)启动子区甲基化与behcet病的关系。方法:1.利用基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(maldi-tofms)定量检测behcet病患者和健康对照cd4+t细胞tbx21,gata3,rorγt,foxp3,ifn-γ,il-4,il-17a和tgf-β启动子区dna甲基化水平。2.利用荧光定量pcr(rt-pcr)技术检测behcet病患者和健康对照cd4+t细胞内gata3,tgf-β和il-4mrna表达水平。3.利用pearson相关性分析的方法,分析gata3,tgf-β和il-4启动子区dna甲基化水平与其相应的mrna表达的关系。结果:1.活动期behcet病患者体内gata3,tgf-β和il-4启动子区甲基化水平比健康对照显著升高(p<0.05)。2.gata3和tgf-β的mrna表达水平在活动期behcet病患者中显著降低且与其相应的甲基化水平呈负性关系。3.静止期behcet病患者体内gata3和tgf-β启动子区甲基化水平比活动期BD患者显著降低。结论:我们的研究发现,CD4+T细胞中GATA3和TGF-β启动子区高甲基化与中国汉族人群BD的易感性相关。