干细胞在理论研究和临床应用方面都有重要意义.一方面,干细胞研究将有助于阐明机体的发育规律;另一方面,干细胞可以为细胞移植、组织工程等提供理想的细胞来源.肝病的细胞移植治疗已经引起人们广泛的兴趣.移植的细胞能在肝脏中增殖,从而完成肝脏修复工作.然而,由于捐赠肝脏的缺乏、肝细胞体外培养中增殖能力的丢失等,给肝病的细胞治疗带来极大困难.本研究运用胶原酶消化与密度梯度离心相结合的方法分离和纯化人胎肝来源的肝干细胞,并对其生物学表型、增殖能力和分化潜能进行了鉴定.同时也从人胎肝中分离鉴定了类间充质干细胞,并对这类细胞造血支持能力及其分子机制等进行了初步探讨.结果如下:1.胶原酶多次消化与Percoll密度梯度离心能有效分离、富集人胎肝来源的肝干细胞,再结合克隆化培养,可初步纯化出人肝干细胞.2.免疫细胞化学检测表明人胎肝来源肝干细胞表达甲胎蛋白和白蛋白;首次采用流式细胞术检测其表面标记物表达,发现它们表达CD29和CD49f,少量细胞表达E-cadherin,不表达造血细胞标记物CD34、c-kit;低密度培养证实它们具有较强的增殖能力,在体外可以有限次培养传代.这与前人报道的小鼠胎肝来源肝干细胞的特征相一致.3.在诱导剂M作用下能够定向诱导人胎肝干细胞分化为成熟肝细胞,western blot方法和RT-PCR检测发现这些细胞表达细胞色素P450和酪氨酸氨基转运酶.4.通过流式细胞术、免疫细胞化学等鉴定人胎肝中存在类间充质干细胞;与造血干细胞共培养实验证实它们具有造血支持作用;RT-PCR检测表明其表达wnt5A、SDF-1等造血相关基因,发现也表达新的造血相关因子mkirre的同源基因hkirre.5.通过逆转录病毒转染系统建立了hkirre稳定表达的AFT024细胞系,初步证实其具有促进造血干细胞扩增的作用.结论:人胎肝中存在着肝干细胞,经富集纯化后可以在体外培养和有限次传代,在诱导剂M等因子作用下能够分化为具功能的成熟肝细胞.胎肝内还存在类间充质干细胞,具有支持造血干细胞扩增的能力,hKirre基因的表达可能与此有关.