【摘 要】
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目的：构建表达Exendin-4重组双链腺相关病毒（dsAAV）载体，包装并检测重组病毒转染细胞效率及表达Exendin-4浓度，观察重组dsAAV治疗2型糖尿病大鼠模型效果。方法：重叠延伸PCR扩增Exen
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目的：构建表达Exendin-4重组双链腺相关病毒（dsAAV）载体，包装并检测重组病毒转染细胞效率及表达Exendin-4浓度，观察重组dsAAV治疗2型糖尿病大鼠模型效果。方法：重叠延伸PCR扩增Exendin-4基因片段，应用基因工程方法构建加有神经营养因子4信号肽的dsAAV载体pSSHG/NT4-Exendin-4，使用表达GFP的对照AAV转染NIH3T3细胞观察转染效率，ELISA法检测重组病毒转染NIH3T3细胞上清Exendin-4浓度，同时与ssAAV比较；注射重组dsAAV于糖尿病大鼠模型颌下腺，分别于2、4、6及第8周检测血糖水平、胰岛素浓度，免疫组化方法检测颌下腺Exendin-4及胰岛素的表达。结果：经限制性内切酶及测序证实载体构建成功，测定重组dsAAV滴度为2.5×1011pfu，较ssAA滴度高(2.5×109pfu)；dsAAV/GFP转染NIH3T3细胞表达绿色荧光强；ELISA法检测感染dsAAV的NIH3T3细胞上清中Exendin-4的浓度为181.1±8.75pmol/ml，较ssAAV分泌浓度（133.81±8.09pmol/ml）升高（p<0.05）；dsAAV/Exendin-4治疗组鼠血糖控制良好，增加胰岛素分泌，与对照组比较有显著统计学差异（p<0.05）。治疗组大鼠颌下腺Exendin-4及胰岛素免疫组织化学染色阳性。结论：成功构建、包装可表达Exendin-4的重组dsAAV，具有高效转染能力，对糖尿病大鼠具有持续控制血糖及促进胰岛素分泌的治疗效果，为其应用于临床打下基础。
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