板蓝根(Isatidis Radix)为传统常用中药，是十字花科植物菘蓝Isatisindigotica Fort.的干燥根。具有清热解毒，凉血利咽之功效，可用于瘟疫时毒，发热咽痛，温毒发斑，痄腮，烂喉丹痧，大头瘟疫，丹毒，痈肿等征状。临床上常用于治疗流感，腮腺炎，温病发热，风热感冒，咽喉肿烂，流行性乙型脑炎，肝炎等病毒性疾病。　　板蓝根饮片为板蓝根除去杂质，洗净，润透，切厚片，干燥后制得。　　板蓝根颗粒是以板蓝根为原料的最具代表性的中药制剂。收录于2010版《中国药典》，其制备工艺:板蓝根1400g，加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，煎液滤过，滤液合并，浓缩至相对密度为1.20(50℃)，加乙醇使含醇量达60％，静置使沉淀，取上清液，回收乙醇并浓缩至适量，加入适量的蔗糖粉和糊精，制成颗粒，干燥，制成1000g;或加入适当的糊精、或适量的糊精和甜味剂，制成颗粒，干燥，制成600g，即得。具有清热解毒，凉血利咽，消肿之功效;用于热毒壅盛，咽喉肿痛;扁桃腺炎、腮腺炎见上述证候者。　　复方板蓝根颗粒是以板蓝根为原料的常用中成药，具有清热解毒，凉血。用于温病发热，出斑，风热感冒，咽喉肿烂，流行性乙型脑炎，肝炎，腮腺炎。仅收录于《部颁标准》（标准编号:WS3-B-2377-97），无指标性成分，无含量测定项，不能科学、有效、全面地控制药品的质量。　　本课题以板蓝根中的特征性药效成分芥子苷类化合物（原告依春、表原告依春和R，S-告依春等）为研究对象，建立手性成分定量分析方法。通过从源头到成品全过程的系统研究，揭示板蓝根在加工炮制、制剂（中间体）等生产过程中芥子苷类化合物的动态变化规律和关键影响因素，探讨“中药材-饮片-制剂（中间体）”质量控制的相关性与一致性，为建立板蓝根及其制剂的科学的品质评价方法奠定基础。同时，以提高复方板蓝根颗粒质量标准为目标，选择与功效相关且专属性强的指标成分，建立准确、简便、适用的分析方法，起草质量标准草案。上述研究对于保证板蓝根及其制剂质量稳定可控具有重要意义。　　1.采用高效液相色谱法同时串联紫外和圆二色谱检测器(HPLC-UV-CD)建立了同时测定板蓝根及其制剂中芥子苷类成分（原告依春、表原告依春、R-告依春和S-告依春）含量的方法，重复性好、准确可靠。对市售板蓝根药材、饮片和板蓝根颗粒进行含量测定。结果表明，其中芥子苷类成分的含量差异较大，市售药材中原告依春和表原告依春含量高，R-告依春和S-告依春含量低，市售饮片中原告依春和表原告依春含量显著降低，R-告依春和S-告依春含量升高，市售颗粒剂中基本不含原告依春和表原告依春，出现此现象可能与板蓝根药材在饮片加工和提取过程中，原告依春、表原告依春转化为R-告依春和S-告依春有关。为进一步研究板蓝根在加工炮制、制剂等生产过程中药效成分芥子苷及其降解产物的动态变化规律和关键影响因素奠定基础。　　2.采用所建立的HPLC-UV-CD的方法，以原告依春、表原告依春、R-告依春和S-告依春为指标成分，探讨“中药材-饮片-制剂（中间体）”质量控制的相关性与一致性。　　为研究板蓝根在炮制过程中芥子苷类含量的动态变化规律，以板蓝根药材为研究对象，采用单因素试验设计，考察泡洗时间、润制水量、润制温度、润制时间、切片厚度、干燥温度和干燥时间等影响因素。结果表明，随着泡洗时间的延长，原告依春和表原告依春的含量显著降下，随水易流失;随润制水量增加，原告依春、表原告依春含量明显下降，R-告依春、S-告依春含量明显增加，可促转化，润制水量过多时（为1.2倍），原告依春、表原告依春含量减少，但R-告依春、S-告依春含量并未增加，此时水量过多，芥子苷类随水流失;润制温度升高和润制时间增加，也可以促进转化，使原告依春和表原告依春含量减少，R-告依春和S-告依春含量增加;不同的切片厚度、烘干温度和时间，芥子苷类化合物的含量也不同，切制成厚片，60℃烘干较合适。泡洗时间、润制水量、润制温度、润制时间、切片厚度和干燥温度均是芥子苷类动态变化的影响因素，其中润制水量、润制温度和润制时间是关键影响因素。基于单因素试验结果，固定泡洗时间为抢水洗、切片厚度为厚片和干燥温度为60℃，以润制水量、润制温度和润制时间为考察因素，进行正交试验，确定最佳提取工艺:加水1倍量，60℃润制6小时，切厚片，60℃烘干。在炮制过程中为尽可能保留药效成分，建议参数设定时，应注意对水量和温度的控制，在洗净过程中，采用抢水洗净，且润制水量不宜超过药材总量的1.0倍，为减少润制时间可采用加热软化，但温度不宜过高，因控制在60℃内。　　为研究板蓝根在提取过程中芥子苷类的动态变化规律，板蓝根饮片为研究对象，采用单因素试验设计，考察粉碎度、浸泡时间、浸泡温度、提取溶剂量和提取时间等影响因素;结果表明，板蓝根以饮片和粗粉形式提取，四种化合物的提取效果差异不大。考虑企业实际生产，建议选择饮片进行提取。当浸泡温度在常温至60℃时，随着浸泡时间的延长原告依春和表原告依春的含量显著减少，R-告依春和S-告依春的含量显著增加，在一定时间内，可发生完全转化，转化速率:60℃＞40℃＞常温;当浸泡温度在80℃时，转化受抑制，推测酶的最适宜温度在60℃左右;提取水量和提取时间对R-告依春和S-告依春的提取率均具有影响，浓缩温度和60％醇沉浓度对R-告依春和S-告依春的转移率基本无影响。浸泡时间和浸泡温度为芥子苷类动态变化的关键影响因素，粉碎度、提取溶剂量和提取时间为影响化合物的提取率的主要影响因素。基于单因素试验结果，固定浸泡时间为2h，浸泡温度为60℃，以提取时间、提取溶剂量和提取次数为考察因素，进行正交试验，确定优化提取工艺:取板蓝根药材，加水10倍量，煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，煎液滤过，滤液合并，浓缩(100℃)，加60％乙醇，静置沉淀，取上清液，浓缩(100℃)，制粒。在板蓝根颗粒的制备时，建议先进行浸泡，在加热提取，浸泡温度应低于60℃，同时浸泡时间应尽可能长，增加R-告依春和S-告依春的含量。但考虑实际工业生产，也可采用常温浸泡。　　本实验选择6批板蓝根药材，据上述研究所得优化工艺进行炮制和提取，采用HPLC-UV-CD的方法，建立药材、饮片、制剂（中间体）的定量特征指纹图谱，运用国家药典委员会出版的“中药指纹图谱相似度评价系统2.0版”软件进行一致性和相关性分析。结果表明，药材、饮片和制剂（中间体）各自间具有较好的一致性;板蓝根药材-饮片-制剂（中间体）间具有较好的相关性。为保证板蓝根药材-饮片-制剂（中间体）质量，需从源头开始控制，采用合理的炮制工艺和提取工艺。　　3.为提升复方板蓝根颗粒的质量标准，采用薄层色谱法，以精氨酸、亮氨酸、R,S-告依春和靛玉红作为指标成分进行定性鉴别;采用高效液相色谱法，以尿苷、鸟苷、R,S-告依春和腺苷作为指标成分进行含量测定。结果表明，本方法中薄层色谱斑点清晰，分离度好;尿苷、鸟苷、R,S-告依春和腺苷分别在0.0017～0.1060mg·mL-1(r=1.0000)、0.0016～0.1002 mg·mL-1(r=0.9999)、0.0016～0.1011 mg·mL-1(r=1.0000)和0.0015～0.0959 mg·mL-1(r=0.9997)的范围内与峰面积呈良好的线性。尿苷、鸟苷、R,S-告依春和腺苷的平均回收率分别为100.9％、100.2％、97.8％和100.2％。所建立的方法简单灵敏，准确可靠，重复性好，可用于复方板蓝根颗粒的质量控制。起草质量标准修订草案，提交国家药典委员会，提升复方板蓝根颗粒的质量标准。