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烟粉虱Bemisia tabaci(Gennadius)是世界上危害最为严重的入侵性害虫之一,也是湖北省的主要害虫,准确地鉴别烟粉虱入侵生物型和土著生物型具有十分重要的现实意义。mtCOI PCR-RFLP技术具有简单、经济、快速的特点,是当前应用最广泛的烟粉虱生物型快速鉴定技术,但是,不同限制性内切酶为基础的mtCOIPCR-RFLP技术在鉴定我国烟粉虱种群中的有效性仍不明确。本论文通过以线粒体细胞色素氧化酶Ⅰ(mitochondrial cytochrome oxidase I,mtCOI)为基础的PCR-RFLP和基因测序的方法,鉴定湖北5个棉花主产区烟粉虱地理种群的生物型组成,并分析5个地理种群与其他省种群的系统发育关系。本研究比较了已报导的5种限制性内切酶(AluⅠ、TaqⅠ、Tru9Ⅰ、MseⅠ和VspⅠ)mtCOI PCR-RFLP技术在鉴别中国烟粉虱种群入侵生物型和土著生物型(B型、Q型,ZHJ1型、ZHJ2型、ZHJ3型)的有效性。本研究通过寄主转换的方法获得寄主适应性差异,应用生物信息学、半定量。PCR及荧光定量PCR等技术方法,分析烟粉虱寄主适应性改变后细胞色素P450的基因表达量的差异性。主要结果如下:
1.Q型烟粉虱为湖北省棉花主产区的优势种群而武汉温室种群则均为B型烟粉虱,土著生物型ZHJ1型在大田中略有分布；系统发育分析则表明,湖北省棉花主产区B型和Q型烟粉虱种群均与中国其它多个省的烟粉虱种群亲缘关系较近,有助于预测湖北烟粉虱的入侵途径。
2.明确国外报道的5种限制性内切酶对中国烟粉虱生物型的适用性.AluⅠ-mtCOIPCR-RFLP技术能有效鉴别中国ZHJ1型、ZHJ3型和95.6％的Q型烟粉虱个体,却不能区分B型和ZHJ2型烟粉虱；应用TaqⅠ-mtC0I PCR-RFLP技术能有效鉴别中国ZHJ1型、ZHJ2型和B型烟粉虱个体,不能区分ZHJ3型和97.0％的Q型烟粉虱个体；而VspⅠ-mtCOIPCR-RFLP技术不能鉴别ZHJ1型和98.5％的Q型烟粉虱个体,也不能区分B型和ZHJ2型烟粉虱,但依然可以鉴别B型和Q型烟粉虱；内切酶MseⅠ和Tru9Ⅰ则不能有效鉴别上述5种烟粉虱生物型。
3.烟粉虱寄主适应性改变与CYP4基因有关克隆出烟粉虱P450家族中的部分基因,半定量PCR的试验方法,从克隆出的P450基因中筛选出了烟粉虱寄主适应性改变后CYP4基因差异量的表达。