泛素(Ubiquitin)是一种广泛存在于真核细胞中的小分子量蛋白质，其基本功能是通过泛素-蛋白水解酶复合体通路(Ubiquitin proteasome pathway,UPP)高效并高度选择性降解蛋白质。昆虫泛素在调控转录因子、调节细胞周期、细胞凋亡、细胞生长以及信号转导中起重要作用。　　 本文以小菜蛾Plutella xylostella (L.)为试虫，克隆了小菜蛾泛素延伸蛋白基因Px-ubi，对Px-ubi进行了原核表达和分离纯化，研究了其时空表达特征，并应用RNAi技术初步研究了Px-ubi和几丁质酶之间的关联作用，为进一步研究Px-ubi在小菜蛾发育与环境适应进化中的功能提供基础。主要结果如下：　　 根据GenBank中登录的昆虫泛素延伸蛋白基因序列，设计简并引物，采用RT-PCR和RACE方法，从小菜蛾3龄幼虫中克隆获得泛素延伸蛋白基因Px-ubi全长序列（GenBank登录号FJ527489）。Px-ubi核苷酸序列全长537bp，其中开放阅读框全长387bp，编码128个氨基酸残基，预测相对分子量16.7kDa，等电点9.1。Px-ubi与己知真核生物泛素延伸蛋白的同源性为92％-98％。利用软件Discovery studio进行同源建模，获得Px-ubi基因编码蛋白的理论三维结构，结果显示，Px-ubi的三维结构主要由1个α螺旋、4个β折叠以及β转角和不规则卷曲组成，4个β折叠两两反向平行排列在α螺旋的一侧。　　 将该基因重组到表达载体pET-32a(+)中，获得重组质粒pET32α-Pxubi，并转入原核细胞中表达。SDS-PAGE和Western blot分析表明，经IPTG诱导后，Px-ubi能在大肠杆菌BL21中高效表达，电泳检测到约16.7kD的特异性外源蛋白，与预测的Px-ubi蛋白分子量相吻合，培养温度和时间对Px-ubi原核表达的影响不显著。　　 运用荧光定量PCR的方法，研究了Px-ubi在小菜蛾生长发育阶段的表达。结果表明，Px-ubi在小菜蛾各个龄期是普遍存在的，其中在卵期、3龄幼虫和预蛹期的含量较高，成虫期含量较低，表明Px-ubi可能在小菜蛾虫态转换的关键生理发育时期中具有重要作用。　　 应用RNAi技术沉默Px-ubi，测定小菜蛾几丁质酶活力的变化情况，探究二者之间可能存在的关系。结果表明，当饲喂到小菜蛾3龄幼虫24h时基因沉默效果达到最好。应用DNS法测定RNAi处理和未处理的不同发育阶段的小菜蛾几丁质酶活力，结果显示当Px-ubi的沉默效果达到最好时，被处理的小菜蛾的几丁质酶活力也达到最高，间接说明Px-ubi与小菜蛾几丁质酶活性之间可能具有紧密的关联作用，推测Px-ubi可能参与小菜蛾表皮形成或蜕皮过程，从而调节小菜蛾生长发育。