【摘 要】
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有囊膜病毒进入细胞(viral entry)的过程包括吸附、受体结合、膜融合等步骤.这一过程一直以来是抗病毒药物和疫苗研究,以及以病毒作为基因转移载体研究的靶点.该课题着眼于这
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有囊膜病毒进入细胞(viral entry)的过程包括吸附、受体结合、膜融合等步骤.这一过程一直以来是抗病毒药物和疫苗研究,以及以病毒作为基因转移载体研究的靶点.该课题着眼于这一过程对三种正链RNA病毒进行了以下相关研究:1.抑制SARS-CoV进入细胞的小分子化合物筛选;2.HIV-1中和抗体的研究;3.通过对囊膜蛋白修饰改进构建AMLV高效基因转移载体;第一部分:抑制SARS-CoV进入细胞的小分子化合物筛选;SARS-CoV是重症急性呼吸综合症(Severe Acute Respiratory Syndrome,SARS)的病原体,已确定SARS-CoV是一种新型的冠状病毒.今年年初爆发的SARS对全世界尤其是中国造成了巨大的冲击.目前临床还没有有效的SARS治疗药物,如何尽快找到抗SARS-CoV的药物是当前SARS研究的一个重点.第二部分:HIV-1中和抗体的研究;中和抗体研究是当前HIV-1疫苗研究的重点.一直以来,有很多研究尝试用各种不同的方法呈递2F5的识别表位,试图能够刺激机体产生中和抗体,但都没有成功.该实验着眼于HIV-1广谱中和抗体2F5识别表位的呈递,力图诱导动物机体产生2F5抗体相似的中和抗体.该实验将含2F5识别序列ELDKWA的HIV-1囊膜蛋白gp41胞外区逐段截短,通过逆转录表达系统表达于小鼠骨髓瘤细胞SP2/0细胞表面,用2F5单克隆抗体筛选阳性细胞免疫BALB/c小鼠,取小鼠的免疫血清作HIV-1抗体和中和抗体检测,结果表明血清中有抗HIV-1 gp41序列的抗体存在,但此抗体没有抗HIV-1的中和活性.第三部分:通过对囊膜蛋白修饰的改进构建AMLV高效基因转移载体;AMLV逆转录病毒载体是基因治疗中普遍使用的一种基因转移载体.为了提高AMLV载体转移基因的效率,该实验构建了16种AMLV囊膜蛋白突变体,用这些囊膜蛋白突变体包装的MuLV假病毒侵染293T、Hela、NIH3T3、HOS 和COS7细胞,luciferase活性检测结果表明,将AMLV囊膜蛋白SU的PRR 区的部分序列替换为RGD-RR-RGD和RGD-RR序列之后,病毒对COS7细胞系的侵染水平有提高.
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