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目的：通过对H7N9流感病毒的HA蛋白受体结合域(120-259位氨基酸)随机突变，利用双向反向遗传学系统PCDNA-RG，以A/PR/8/1934(H1N1)病毒内部六基因为骨架，构建H7N9禽流感病毒的随机突变病毒库；以α-2,3唾液酸酶处理的豚鼠血细胞作为特异性吸附载体，从H7N9突变病毒库中筛选出能与α-2,6唾液酸受体结合的H7N9流感病毒，并对筛选的H7N9流感病毒的基因突变位点和生物学特征进行初步探讨。 方法： 1.构建HA蛋白受体结合域随机突变的HA序列：A/Human/Shenzhen/1/2013(H7N9)的HA基因为模板，分别扩增HA基因的RBD序列（HA-RBD），以及HA基因的RBD上游序列（HA-RBD-u）和HA基因的RBD下游序列（HA-RBD-d）。以HA基因的RBD序列为模板，利用随机突变试剂盒获取随机突变的HA-RBD序列（HA-RBDs）。将HA-RBDs克隆到pGEM?-T-Easy Vector，挑选阳性克隆株，测序，分析突变位点；计算突变病毒库容量。利用重叠PCR技术将HA-RBDs序列与HA-RBD-u序列和HA-RBD-d序列拼接为完整的HA序列，BsmBI酶切后与PCDNA-RG连接，转化大肠杆菌JM109，提取质粒，测序。 2. H7N9流感病毒突变病毒库构建：将与双向转录载体连接的NA基因和突变的HA基因与A/PR/8/34(H1N1)流感病毒的6个内部基因进行基因重组，构建H7N9流感病毒突变病毒库。 3.α-2,6受体结合特异性的H7N9流感病毒的筛选：用α-2,3唾液酸酶处理的红细胞筛选具有与α-2,6唾液酸受体结合特性的H7N9流感病毒。并用噬斑纯化实验筛选出单克隆的病毒。 4.受体结合特异性与体外繁殖能力的测定：通过固相结合实验对筛选的H7N9流感病毒进行受体结合特异性分析，通过利用流感病毒感染MDCK细胞，结合血凝实验测定筛选的H7N9流感病毒的体外繁殖能力。 结果： 1.成功构建H7N9流感病毒突变病毒库，病毒突变库容量为1.33×107cfu/mL。 2.成功拯救A/PR/8/34(H1N1)流感病毒和重组H7N9流感病毒。 3.成功筛选出3种类型与α-2,6唾液酸受体结合特异性的H7N9流感病毒突变株。突变位点分别为I126V、S194P/A435S、D127V/S136G/A169T。 4.D127V/S136G/A169T突变株的体外增殖能力和与α-2,6唾液酸受体结合特异性均有所提高。 结论：成功构建H7N9禽流感病毒随机突变病毒库，库容量达到107级，满足建库要求；从突变病毒库中成功筛选出具有与α-2,6唾液酸受体结合特异性的H7N9禽流感病毒，为进一步探讨H7N9禽流感病毒在哺乳动物间有效传播的分子机制打下基础。