论文部分内容阅读
目的：探讨TRPV4通道是否参与正常及高血压大鼠的心肌缺血再灌注损伤，并对其可能机制进行初步研究。 方法：(1)选取健康Sprague-Dawley(SD)大鼠并运用“两肾一夹”方法制备高血压大鼠模型。健康(normal, n)SD大鼠/高血压(hypertensive, h)大鼠均分别随机分为缺血/再灌注(nI/R/hI/R)组、TRPV4抑制剂(nRN1734/hRN1734)组和 TRPV4激动剂(nRN1734/hRN1747)组(每组n=6)。(2)采用langendorff离体心脏灌流装置对上述各组大鼠离体心脏进行灌流。nI/R/hI/R组在平衡灌流20 min后，全心缺血30 min，复灌120min；nRN1734/hRN1734组在复灌前5 min给予特异性TRPV4抑制剂RN1734(10μM)，其余处理同 nI/R/hI/R组；nRN1734/hRN1747组在复灌前5 min给予特异性TRPV4激动剂RN1747(10μM)，其余处理同nI/R/hI/R组。Powerlab生物信号处理系统记录各组血流动力学指标，收集并测量各组冠脉流出液(coronary flow，CF)每分钟流量，并检测灌流液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量，用TTC染色法分析心脏梗死面积；免疫组化及western blotting法检测TRPV4蛋白在各组大鼠心肌组织中的表达差异。检测TRPV4开放时心肌细胞内ROS及Ca2+含量的变化 结果：(1)成功制备了“两肾一夹”高血压大鼠模型。造模术后7天、14天，大鼠与造模前相比血压明显升高，且差异均有显著统计学意义(P<0.001)。(2)与单纯缺血/再灌注相比，TRPV4通道开放使正常大鼠及高血压大鼠缺血后再灌注期左室发展压(LVDP)、左室舒张末压(LVEDP)、左室压最大上升/下降速率(±dp/dtmax)、心率(HR)及冠脉流量(CF)的恢复明显增强(P<0.05)，而心肌梗死面积和乳酸脱氢酶含量明显减小(P<0.01)。(3)免疫组化及Western blotting结果显示高血压大鼠心肌上TRPV4蛋白的表达高于正常大鼠(P<0.05)；与单纯缺血再灌注比，TRPV4激动剂RN1747可使正常和高血压大鼠心肌TRPV4表达增强(P<0.05)，而TRPV4抑制剂RN1734可使TRPV4表达减少(P<0.05)。(4)与对照组相比，TRPV4通道的开放引起心肌细胞内Ca2+浓度增加、ROS生成减少(P<0.05)。 结论：TRPV4通道开放对正常及高血压大鼠心肌缺血再灌注损伤有保护作用；其机制可能与其开放导致钙信号介导的心肌细胞内ROS生成减少有关。