论文部分内容阅读
目的：探讨球型脂联素（gad）对高糖环境下人脐静脉内皮细胞（HUVECs）NO及DDAH-ADMA系统的影响方法：体外培养HUVECs至对数生长期，gad(2.5ug/ml)处理高糖诱导不同时间（24h、48h）HUVECs，不同浓度gad（0.1、0.5、2.5、12.5μg/ml）处理高糖诱导48h HUVECs，硝酸还原酶法测定培养液上清NO浓度；再将HUVECs随机分为正常对照组（5.5mmol/L葡萄糖）、高糖组（33.0mmol/L）、gad组（33.0mmol/L葡萄糖+2.5ug/ml gad），L-NAME组（33.0mmol/L葡萄糖+2.5μg/ml gad+100μmol/LL-NAME），硝酸还原酶法检测培养液上清NO浓度，化学比色法测定NOS活力，高效液相色谱法分析ADMA水平，根据ADMA的量反映DDAH活性，westernblot检测eNOS、P-eNOS的表达。结果：①gad处理高糖诱导HUVECs不同时间（24h、48h），高糖作用24h，引起NO分泌增加，而作用48h，NO分泌显著减少（P<0.05），与同一时间高糖组相比，gad组NO显著升高（P<0.05）；②不同浓度gad（0.1、0.5、2.5、12.5μg/ml）处理高糖诱导48h HUVECs，NO水平先随gad浓度的增加而显著增加，但gad2.5μg/mL与12.5μg/mL相比，NO水平差异无显著性（P<0.05）；③2.5μg/ml gad处理高糖诱导48h HUVECs，高糖组较对照组相比，NO含量显著降低，NOS活性及p-eNOS表达均减少（P<0.05），而总eNOS表达无显著差异（P>0.05）；④高糖组与正常对照组相比ADMA含量升高，DDAH活性降低，差异均有统计学意义（P<0.05），2.5μg/mL gad处理后，与高糖组相比，NO含量显著升高，NOS活性显著增强，P-eNOS表达显著增加，总eNOS蛋白表达仍无统计学差异（P>0.05）；ADMA水平gad组与高糖组相比降低，DDAH活性增加，差异均有统计学意义（P<0.05），加入L-NAME100μmol/L，与gad组相比，NO含量显著减少，NOS活性减低，P-eNOS表达减少，差异有统计学差异（P<0.05），总eNOS表达仍无差异（P>0.05），ADMA水平升高，DDAH活性降低，差异均具有显著性（P<0.05）。结论：1、高糖环境下gad可逆转HUVECs合成NO的减少，并升高NOS活性，增加eNOS-Ser1177磷酸化，但对eNOS总蛋白表达并无影响。2、高糖环境下gad可升高DDAH活性，降低ADMA水平，而这种作用可能依赖于gad升高NO水平，恢复NOS活性；同时，DDAM活性升高以及ADMA水平下降又可升高NO水平，增加NOS活性。