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目的:了解耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)对抗菌药物的耐药情况及其耐药机制,为临床上合理应用抗菌素提供依据。
方法:收集2005年9月~2006年12月分离自河北医科大学第一医院临床患者的MRSA 45株,采用头孢西丁纸片法和苯唑西林微量肉汤法鉴定为MRSA;采用Kerby-Bauer纸片扩散法测定细菌对17种抗生素的敏感性;采用聚合酶链式反应(PCR)对45株MRSA的β-内酰胺类抗菌药物耐药基因mecA、四环素类抗菌药物耐药基因tetM、大环内酯类抗菌药物耐药基因ermA/B/C、氨基糖苷类抗菌药物耐药基因aac(6`)/aph(2``)和aph(3`)-III和杀白细胞毒素(PVL)基因进行检测和研究;选取PVL基因阳性的15号菌株进行DNA序列分析;并采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对PVL,基因阳性的12株MRSA进行同源性分析。
结果:1 标本的类型和来源:45株MRSA分离自痰液、伤口分泌物等7种临床标本,其中痰标本和伤口分泌物各17例,所占比例均为37.8%;标本分别来源于呼吸科、烧伤科、普外科等10个临床科室。其中呼吸科13例,所占比例最大为28.9%。 2 药物敏感试验结果:45株MRSA对万古霉素敏感率达100%;对替考拉宁、氯霉素的敏感率分别为91.1%和75.6%;对青霉素G、红霉素、阿齐霉素、头孢唑啉、克林霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、四环素和庆大霉素的耐药率分别为100%、91.1%、86.7%、84.4%、82.2%、80%、77.8%、71.1%和51.1%。3 各种耐药基因的检出情况:45株MRSA中耐药基因mecA、tetM、ermA/B/C、aac(6`)/aph(2``)和aph(3`)-Ⅲ的阳性率分别为100%、57.8%、73.3%、51.1%、22.2%;有12株检出杀白细胞毒素(PVL)基因,占总菌株的26.7%。4不同来源科室的各种基因检测结果:来源于呼吸科的MRSA的耐药基因mecA、tetM、ermA/B/C、aac(6`)/aph(2``)、aph(3`)-Ⅲ和PVL基因阳性菌株数占总阳性菌株的百分率分别为28.9%(13/45)、34.6%(9/26)、30.3%(10/33)、30.4%(7/23)、20%(2/10)、8.3%(1/12);来源于烧伤科的MRSA的耐药基因mecA、tetM、ermA/B/C、aac(6`)/aph(2``)、aph(3`)-Ⅲ和PVL基因阳性菌株数占总阳性菌株的百分率分别为17.8%(8/45)、23.1%(6/26)、21.2%(7/33)、21.7%(5/23)、50%(5/10)、25%(3/12)。我院呼吸科和烧伤科的MRSA中各种耐药基因检出率较高。 5PVL基因阳性菌株测序结果:对15号PVL基因阳性菌株经双向测序,所得基因序列与Genbank中登陆的PVL基因序列比较,经DNASTAR软件分析,与AB295473.1序列100%一致。 6 12株PVL基因阳性的MRSA经PFGE电泳的同源性分析结果:12株PVL基因阳性MRSA的PFGE图谱分为A、B 2个型,其中A1型8株,A2型1株,B型3株,A型为主要流行株;各型菌株在烧伤科、普外科、皮肤科、肾内科间有流行,主要流行菌株可在各病区之间传播。结论: 1 MRSA呈多重耐药:在河北医科大学第一医院分离的MRSA对β-内酰胺类、四环素类、氨基糖苷类、大环内酯类、氟喹诺酮类抗菌素呈多重耐药,对青霉素G、红霉素、克林霉素、环丙沙星、四环素的耐药率均在70%以上;除了对万古霉素敏感率达100%外,对替考拉宁、氯霉素的敏感率也较高。万古霉素可作为MRSA感染的首选。2临床分离的多重耐药MRSA中耐药基因mecA、tetM、ermA/B/C、aac(6`)/aph(2``)、aph(3`)-Ⅲ检出率较高,表明耐药基因的存在是MRSA对β-内酰胺类、四环素类、氨基糖苷类、大环内酯类抗菌素呈多重耐药的重要机制。3各科室耐药基因检出率有所不同,呼吸科和烧伤科较高。 4 PVL基因的检出率为26.7%,PVL是MRSA重要的致病因子。512株PVL基因阳性的MRSA根据PFGE图谱分为A、B 2个型,A型为主要流行株,主要流行菌株可在多病区之间传播。