松材线虫病是一种重要的林业病害,向来有“松树的癌症”的称号,对松树的危害十分严重,它的病原是松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)。它是包括日、韩、美、加拿大、墨西哥、尼日利亚和我国等许多国家重要的林业病害,也是许多国家的检疫对象,在我国属于二级检疫危害生物,造成的损失难于估计。但是因为它和致病性弱的拟松材线虫在形态上极其相似,从形态上难以区分,尤其是低龄期幼虫,这对松材线虫检疫和防治带来了很大的困难,所以松材线虫的快速检测至关重要。传统的形态鉴定、生化以及其他分子技术等方法存在费时、准确度不高、灵敏度低等缺点、不易形成标准。因此建立标准、快速、准确、灵敏的方法具有重要的意义。各种PCR 技术(如RAPD、RFLP 等)、同工酶技术、血清学技术以及实时荧光PCR 技术、生物芯片技术等已经应用于松材线虫检测方法的研究,这些方法能够准确、有效地鉴别和鉴定松材线虫,但是,仍然需要较长的时间,仍然不能够满足口岸检疫的要求。实时荧光定量PCR 能够在DNA 扩增过程中获得结果,缩短了检测时间,本研究旨在建立松材线虫的实时荧光PCR 检测技术。本文首先进行了不同线虫的基因组DNA 提取方法的筛选,确定了一种适宜荧光PCR 方法的提取方法,即蛋白酶K 方法进行单条线虫基因组DNA 抽提,此方法既经济又快速,减少了一些操作上的人为污染,可以用于快速地进行普通PCR 检测以及实时荧光PCR 检测。其次,通过对松材线虫和拟松材线虫核糖体DNA ITS 区的克隆,并进行测序,运用ClustulX1.8.1 软件进行比较,松材线虫同一种群的序列