目的:尽管离子通道是新药研发的诱人靶点,但是由于缺乏能够进行有效且低成本的高通量或中通量筛选的检测方法,因此离子通道靶点药物的系统筛选仍然具有挑战性。在新药研发早期筛选中,荧光成像酶标仪与电压敏染料相结合可能是一种多靶标离子通道阻断剂筛选的很有前途的工具。在本研究中,我们优化并验证了应用电压敏感染料进行检测化合物对稳定表达不同亚型GABAA受体细胞的作用。我们的结果表明,这种基于电压敏感染料的检测可提供一种灵敏和定量的方法来研究功能性药物对GABAA受体亚型的作用,从而对其实现中等通量,低成本,多靶点的早期筛选。方法:在本研究中建立了稳定表达不同亚型的GABAA受体的HEK-293细胞系,包括α1β2γ2,α2β3γ2,α3β3γ3,α4β3γ2,α5β3γ2,α6β2γ2,然后使用 PCR 和手动膜片钳方法证实了这些靶基因的功能表达。将不同亚型的GABAA受体HEK-293细胞系在96孔板上培养24小时,然后除去培养基,并向细胞中加入电压敏感染料与待测化合物,将孔板转移至酶标仪进行荧光值检测。结果:首先,我们针对多种GABAA受体亚型计算了γ-氨基丁酸EC50值和Bicuculline IC50值,生成相应的剂量反应曲线并检测了一系列已知化合物的作用。通过作为测定实验方法可靠性的有力指示,Z’值的计算,表明本研究开发的测定方法具有良好的重现性。此外,测试化合物的结果也与文献中先前的报道一致。结论:通过以上研究,我们证明该方法简便,快速,可靠,为新药研发早期,GABAA受体多靶点筛选提供了一个新的技术方法。