低温诱导过程中蝴蝶兰蛋白质差异表达研究

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本文采用蛋白质组学技术研究了在花芽特定的发育阶段不同温度处理对蝴蝶兰(Phalaenopsis)低温诱导花芽分化过程中花梗蛋白质表达的影响。①建立蝴蝶兰花梗蛋白双向电泳体系。对样品制备,蛋白溶解方法等进行了优化:采用改良TCA/丙酮法提取,含硫脲的水化液1:15复溶;获得了可识别1000多个蛋白质斑点的双向电泳图谱,且重显性好、分辨率高。②研究了蝴蝶兰花梗在低、高温诱导发育过程中蛋白质差异表达的变化,结果表明:41个蛋白在低温诱导后发生可重复的表达变化,其中大部分(39个)是表达量的变化,只有2个蛋白(spot5218,7104)是质的变化;所有41个表达发生变化的蛋白点中,有18个蛋白点在T1和T2样品中表现出了相反的变化趋势,其余趋势一致;对12个差异较为显著的蛋白质进行MALDI-TOF/TOF—MS串联质谱分析,共获得11个较好的二级质谱图,通过数据库搜索,其中有9个蛋白质得到了较为可靠的鉴定。这些蛋白质主要与能量代谢(Rubisco活化酶前体相关蛋白)、蛋白质生物合成及修饰(eIF—5A、p78RF、putative polyprotein和糖基转移酶相关蛋白)、细胞防卫(硫氧还过氧化物酶、谷胱甘肽—S—转移酶和抗坏血酸过氧化物酶)等生物学功能有关。这些差异表达蛋白可能在低温诱导和高温抑制蝴蝶兰开花过程中发挥作用,本研究为深入阐明蝴蝶兰春化过程中复杂的调控机制提供了新的依据,也为进一步研究蝴蝶兰春化作用机制奠定了初步基础。
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