论文部分内容阅读
选用89-27、中88375、919-18-4、咸农四号等4个甘肃地区大面积种植的、品质较好、性状优良的冬小麦品种作为基因转化的受体材料.用其幼胚、幼穗、成熟胚作为外植体进行离体培养,研究了不同外植体、基因型对愈伤组织形成及分化的影响,并且分析了取材时期、激素配比和预处理等有关因素的影响,建立了较好的遗传转化体系.在此基础上,采用基因枪法、花粉管通道法、浸泡愈伤组织及浸种法等4种方法将带有几丁质酶基因和带有GNA基因的质粒同时或单独转入小麦细胞,最终得到了转基因候选植株,移栽入大田进行抗虫、抗病试验.主要结果如下:(1)外植体来源对于愈伤组织诱导和生长、植株再生和遗传转化的成功与否影响极大.在所用的3种小麦外植体中,幼胚表现最好,幼穗次之.(2)成熟胚愈伤组织的诱导使用4mg/L的2,4-D浓度较为有利,在MS+6-BA 2.0+NAA 0.5+KT 1.0培养基上分化率较高.低温及CaCl<,2>预处理对成熟胚愈伤组织的影响与小麦品种有关.幼胚及幼穗愈伤组织的最适分化培养基因不同品种而异;(3)利用基因枪技术,将带有几丁质酶基因的质粒(pCAM BAR.chill或pZ100)和带有GNA基因的质粒(pGNA-hyg)同时导入4个小麦品种的幼胚、幼胚愈伤组织及幼穗愈伤组织.(4)利用花粉管通道法,将带有GNA基因的质粒pBI121SSGNA导入4个小麦品种,对26株T1代田间抗性表现较好的T2代植株进行了PCR检测,8株呈阳性,初步证明了外源抗性基因已经转入小麦植株;(5)用愈伤组织浸泡法,将带有GNA基因的pGNA-hyg质粒导入2个小麦品种,其中咸农四号获得11株再生植株.PCR检测在3株小麦中检测到目的基因,平均转化频率为0.75﹪;(6)利用种子浸泡法,将带有几丁质酶基因的pZ100质粒和带有GNA基因的pGNA-hyg质粒同时导入4个小麦品种,经过筛选,919-18-4和咸农四号共获得抗性植株5株,PCR检测显示1株呈nptII基因阳性,3株呈GNA基因阳性,1株呈双阳性,平均转化频率分别为0.12﹪、0.37﹪和0.12﹪;(7)基因枪法转化的T0代植株和花粉管通道法转化的T1代植株在甘肃天水地区进行了田间抗虫、抗条锈病试验.