猪瘟(Classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的一种以高热、出血、死亡率高为特征的高度接触性传染病，是世界粮农组织和各国政府严密监控和检疫的主要传染病之一。CSFV属于黄病毒科瘟病毒属，单股正链RNA病毒。病毒粒子呈圆形，大小38~44 nm，核衣壳是立体对称二十面体，由结构蛋白C，E0，E1，E2和非结构蛋白Npro，P7，NS2， NS3，NS4A，NS4B，NS5A，NS5B构成的。其中，E0糖蛋白既是一种包膜蛋白，又是一种核酸酶，它的活性与病毒在宿主体内的持续感染有直接的关系，可诱导机体产生中和抗体，也是病毒进入敏感细胞的必须蛋白。　　本试验旨在利用原核表达系统，高效表达可产生中和性抗体的E0蛋白，并研究表达蛋白的免疫效果，初步研制快速ELISA猪瘟抗体诊断试剂盒。本试验将猪瘟病毒 E0蛋白在大肠杆菌 BL21(DE3)表达，成功获得了可溶性表达的 E0蛋白，纯化后的E0蛋白的浓度为0.332 mg/mL。表达的最佳条件是：IPTG0.1 mM，温度为20℃，时间为18 h时，对E0蛋白Western Blot分析，发现E0蛋白在31KDa的位置发生了明显的显色反应，能被猪瘟阳性血清特异性地识别，说明表达的可溶性E0蛋白具有良好的反应原性。将E0蛋白作为诊断抗原，确立了抗原的最佳包被浓度为20μg/mL，血清的最佳稀释度为1：800。　　制备了抗猪瘟病毒E0蛋白的单克隆抗体，用E0蛋白免疫6周龄的 BALB/c雌性小鼠，通过细胞融合技术将免疫小鼠的脾细胞与小鼠的骨髓瘤细胞融合，然后通过间接ELISA的方法筛选阳性杂交瘤细胞孔，并通过有限稀释法对杂交瘤细胞进行3次亚克隆，最终获得1株能稳定分泌抗猪瘟病毒 E0蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为1B7。通过间接 ELISA的方法测得杂交瘤细胞株1B7细胞的上清效价可达到1:25600以上，小鼠腹水效价可达到1:4×107以上。