甜菜严重曲顶病毒C2蛋白在病毒与植物互作中的功能分析

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双生病毒是一类植物单链DNA病毒,能侵染广泛农作物并造成严重的农业减产。甜菜严重曲项病毒(BSCTV)是双生病毒曲顶病毒属的一个代表种。本研究通过遗传学、分子生物学和生物化学等手段研究BSCTV编码的C2蛋白在病毒与植物相互作用过程中的功能。农杆菌介导的拟南芥侵染实验发现C2蛋白突变能够引起病毒侵染病症出现延迟和症状减轻,且病毒基因组DNA在受侵染植物中的积累减少。农杆菌介导的烟草共注射实验证实了C2蛋白具有沉默抑制子功能。本研究通过将FWA基因组片段转入C2基因的过表达植物的实验表明C2抑制了宿主对FWA转基因的de novo甲基化。亚硫酸氢盐测序结果显示,C2的突变还能够引起受侵染宿主中病毒基因组的DNA甲基化程度升高。这些结果表明C2蛋白参与抑制宿主抗病毒的转录基因沉默过程。此外,基于酵母双杂交系统,以C2作为诱饵在拟南芥cDNA文库中筛选获得了与之相互作用的SAMDC1蛋白,并通过体外Pull down实验验证了其相互作用。BSCTV侵染实验显示SAMDC1基因的T-DNA插入突变体samdc1-1对BSCTV的敏感性降低,病毒DNA积累减少。在小麦芽胚提取物和拟南芥总蛋白提取物中进行的蛋白降解实验证明了SAMDC1的蛋白降解受到26S蛋白酶体抑制剂MG132的抑制,而C2也能够抑制SAMDC1的蛋白降解。这表明BSCTV C2可能通过正调节SAMDC1的稳定性来影响植物对双生病毒的抗病防御反应。
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