重组HIV-1 Vif 158的表达、复性与纯化研究

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蛋白折叠液相色谱(PFLC)在重组蛋白的包涵体复性过程中具有除变性剂、纯化、复性、回收变性剂的四重作用,已被广泛地应用于蛋白复性与纯化研究。本论文①对大肠杆菌(E.coli)表达的重组人免疫缺陷病毒1型感染因子158(recombinant human immunodeficiency virus type one virion infectivity factor 158, rHIV-1 Vif 158)进行了摇瓶中培养条件的优化,获得了高表达的rHIV-1 Vif 158包涵体;②经超声破碎,洗涤获得包涵体蛋白,对包涵体蛋白的溶解条件进行了比较,获得了rHIV-1 Vif 158包涵体的抽提液;③应用PFLC对rHIV-1 Vif 158包涵体复性与纯化进行研究,为研究HIV-1 Vif 158结构和功能奠定了基础。本文分为四部分:1.文献综述:介绍了HIV-1 Vif蛋白结构和功能的研究进展及研究HIV-1Vif158的意义;简述了蛋白复性的意义和PFLC在蛋白复性与纯化的原理和应用。2. rHIV-1 Vif 158在E.coli表达及包涵体溶解条件的优化:研究了摇瓶中的培养基、温度、诱导时间对rHIV-1 Vif 158表达量的影响及包涵体溶解液对rHIV-1 Vif 158包涵体溶解度的影响。实验结果表明,在M9培养基,温度为35℃、诱导4 h时rHIV-1 Vif 158表达量占菌体总蛋白的33.1%,确定低浓度的脲和去垢剂结合溶解rHIV-1 Vif 158包涵体,可以取得较好的溶解效果,5 mol/L脲和1%的SLS溶解效果最好。3.高效疏水色谱对rHIV-1 Vif 158包涵体复性与纯化:研究了利用疏水色谱饼对不同包涵体抽提液、流动相脲浓度、流动相的pH值、色谱梯度条件和进样量等因素对rHIV-1 Vif 158包涵体的复性并同时纯化的影响,在优化条件下质量回收率为48.6%,纯度为91.3%。4.排阻色谱对rHIV-1 Vif 158包涵体复性与纯化:考察了排阻色谱中的脲浓度,脲梯度SEC的流速对复性与同时的纯化rHIV-1 Vif 158影响,在排阻色谱和脲梯度排阻色谱下复性与纯化rHIV-1 Vif 158包涵体的质量回收率为42.7%和55.3%,纯度分别为86.4%和89.3%。
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