珠三角及邻地鸭疫里默氏杆菌主要生物学特性比较研究

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鸭疫里默氏杆菌(Riemerella ariatipestifer,RA)感染是鸭、鹅、火鸡和其他多种禽类的急性传染病,主要引起水禽的浆膜炎、心包炎、肝周炎。本病常常导致大批幼禽发病、死亡以及生长迟缓、饲料报酬显著下降,而且难以扑灭,病原在发病动物群中持续存在,引起禽感染发病,因此,被认为是造成养鸭业经济损失最严重的疫病之一。 本文从珠三角地区具有上述临床症状的不同水禽病例中分离获得100株菌株,通过培养特性试验和理化特性鉴定,证实为鸭疫里默氏杆菌。对分离菌株进行12种药物的药敏试验,表明所有菌株均有1重以上耐药性;有63株细菌对两种或两种以上的药物表现耐药性;最敏感的药物为奥格门丁,其次为氨苄西林、青霉素,效果最差的是庆大霉素。根据地区的差异等,选择10株菌株进行毒力测定试验。将10株菌株的菌液分别经腹腔接种7日龄雏鸭,观察致病情况,选择毒力最强的菌株进行经呼吸道、肌肉、脚蹼、腹腔、皮下等不同部位接种,选择致病性的接种部位,将菌株制备成全菌液、菌液上清、菌液沉淀、破碎上清、破碎沉淀等菌液成分按最合适的接种部位进行接种,观察不同成分的毒力结果。选择接种不同成分攻毒未死亡的鸭子通过腹腔接种途径接种毒力最强的菌株菌液,观察不同成分的免疫情况。结果表明,选择的10株菌株中,从不同地区的菌株来看,南海3菌株毒力最强;从不同部位来看,腹腔接种最强;从菌株的不同成分来看,全菌液的毒力最强;从免疫原性来看,菌液上清的免疫原性最强。 将保存的菌株制成抗血清的抗原,肌肉接种未免疫公鸡,5次免疫,采血制成抗血清。通过琼脂扩散试验将保存的菌株分成4个血清型。其中血清1型的菌株占80%以上。根据GenBank发表的25株鸭疫里默氏杆菌的外膜蛋白A(omp A)基因序列,合成了一对引物,建立鸭疫里默氏杆菌特异的PCR方法,结果扩增出有707bp大小的片段,而副鸡嗜血杆菌、沙门氏菌、大肠杆菌、巴氏杆菌、链球菌、葡萄球菌等菌株不能扩出相应片段。将10株菌株的PCR产物连接到载体质粒pMD18-T,转化入DH5a细菌中,测定10株鸭疫里默氏杆菌菌株的ompA的基因序列,比较之间的同源性差异、系统发育树和其它生物特性的关系。结果表明10个鸭疫里默氏杆菌的外膜蛋白基因序列的同源性达到90%以上,而与其它物种的同源性很低,菌株的地区分布与外膜蛋白基因序列同源性之间关系不大。
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