【摘 要】
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该文通过对海产名贵经济鱼类花鲈胚胎干细胞(LJES1)、真鲷胚胎干细胞(SBES1)的长期培养,得出了海水鱼类ES细胞的生长特征,目前花鲈ES细胞已传代110代,真鲷ES细胞已传代70代.
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该文通过对海产名贵经济鱼类花鲈胚胎干细胞(LJES1)、真鲷胚胎干细胞(SBES1)的长期培养,得出了海水鱼类ES细胞的生长特征,目前花鲈ES细胞已传代110代,真鲷ES细胞已传代70代.花鲈胚胎干细胞系(LJES1)生长迅速,接种后60小时左右细胞增殖速率达到最大,该实验测得LJES1细胞第13、35、60代时的生长曲线,计算出第13、35、60代的LJES1细胞倍增时间分别为19.76、20.67和21.31小时.LJES1细胞在4-32℃下都能存活,适宜生长温度为20-28℃,其最适生长温度为24-28℃,28℃细胞生长速度达到最大,培养液的适宜pH为7.2-7.4.在实验过程中,我们还观察到LJES1细胞在24℃下最容易贴壁,温度过高或过低对细胞的贴壁都不利.在花鲈、真鲷ES细胞长期传代培养过程中,维持其体外生长、增殖及未分化状态需要在培养基中添加一些生长因子.该实验通过配制省略1种或多种因子的培养基PESM 0-10,计数LJES1细胞在各培养基中增殖的数量,确定各种生长因子对花鲈ES细胞(LJES1)增殖的作用.同时,对LIF因子和bFGF因子的作用进行了重点的研究,发现LIF因子对早期的LJES1细胞增殖几乎没有作用,基主要作用是维持LJES1细胞的未分化状态,但对后期的LJES1细胞的增殖有一定的作用;bFGF因子对LJES1细胞有强烈的刺激生长、增殖的作用;鲈鱼胚胎抽提液(PEE)以及鲈鱼血清(FS)也促进了LJES1细胞的增殖,2-巯基乙醇(2-EM)具有还原血清中的含硫化合物、防止过氧化物对LJES1细胞的损害及促进贴壁的作用,因而也促进了LJES1细胞的增殖.
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