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背景和目的急性白血病是一类造血干、祖细胞来源的恶性克隆性血液系统疾病,其显著特征是细胞过度增殖和凋亡受抑,多种癌基因、抑癌基因及其相关基因功能异常,引起其相应蛋白的变化,导致细胞周期紊乱,细胞恶性增殖,凋亡受阻,促进了白血病的发生发展。多种基因调节着细胞凋亡,细胞凋亡调控异常是多种肿瘤发生发展的关键因素之一。p63基因是p53家族成员之一,与p53基因高度同源,但结构和功能不同。p63在肿瘤中的作用目前还不十分清楚,Frida Lantner等的研究发现：在正常细胞中,TAp63能够上调Bcl-2 mRNA及Bcl-2蛋白质的表达,对于维持成熟B淋巴细胞的生存与增殖能力有重要作用。Bcl-2基因是Tsujimto等从伴有t(14；18)的滤泡性淋巴瘤中发现的一种癌基因,白血病的发生与Bcl-2和bcl-xl等其它凋亡途径调节基因的过度表达与耐药相关。目前国内外对p63基因的研究局限于实体瘤,p63基因在急性白血病中的表达及意义国内外至今未见报道,关于TAp63mRNA及Bcl-2 mRNA在急性白血病表达的意义,值得进一步研究。故本文应用半定量RT-PCR方法检测初治、复发及缓解后急性白血病患者与非恶性血液病患者的骨髓单个核细胞中TAp63mRNA及Bcl-2 mRNA表达水平及它们的相关性,探讨其在急性白血病发生发展中的意义。材料与方法1.研究对象收集81例初治及复发急性白血病(AL),包括50例急性淋巴细胞白血病(ALL)和31例初治及复发急性髓系白血病(AML)患者,同时收集27例非恶性血液病患者为对照。所有急性白血病患者均为郑州大学第一附属医院血液内科2010年3月至2010年9月住院的初治或复发病例。所有急性白血病患者经过血常规、骨髓细胞形态学、细胞化学、免疫表型及细胞遗传学检查,符合急性白血病的诊断标准。81例AL患者中男48例,女33例,中位年龄42岁(14-70岁)；50例ALL包括32例急性B淋巴细胞白血病(B-ALL),18例急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)。31例AML包括6例AML-M3,14例AML-M2,4例AML-M4,7例AML-M5。对照组为同期血液内科非恶性血液病患者27例,其中男10例,女17例,中位年龄38岁(21岁-57岁)。2.半定量RT-PCR法分离单个核细胞,TRIZOL法提取细胞总RNA,逆转录成cDNA,PCR扩增25个循环。电泳后,紫外灯下照相,所有阳性结果进行灰度分析并计算TAp63/β-actin和Bcl-2/β-actin的比值。3统计学处理采用SPSS10.0统计软件进行处理,定量资料用平均值±标准差(x±S)表示,两组独立样本的均数比较用t检验,多组定量资料组间比较采用单因素方差分析,TAp63与Bcl-2表达量的相关性应用Pearson直线相关分析,以a=0.05作为检验水准。P<0.05认为具有统计学意义。结果1 TAp63 mRNA在急性白血病组与对照组的表达50例ALL患者TAp63 mRNA表达的有49例,31例AML患者均表达TAp63mRNA,27例对照组不表达TAp63 mRNA。TAp63 mRNA在急性白血病组表达显著高于非恶性血液病组(P<0.05)。2 TAp63 mRNA在ALL与AML表达的比较对50例ALL和31例AML患者的相对表达量进行比较,结果显示ALL平均表达量(0.92±0.42)显著高于AML(0.73±0.22),差异有统计学意义(P=0.020,<0.05)。3 TAp63 mRNA在不同组别ALL的表达50例ALL包括B-ALL 32例和PT-ALL 18例。32例B-ALL有31例表达TAp63mRNA,18例T-ALL均表达TAp63 mRNA,B-ALL的平均表达量(1.11±0.40)显著高于T-ALL(0.60±0.18),差异有统计学意义(P<0.05)。4 TAp63 mRNA在B-ALL、T-ALL、AML表达的统计分析对B-ALL、T-ALL和AML这三组独立样本的TAp63 mRNA平均表达量进行比较,应用单因素方差分析(F检验),显示三组之间表达量有显著统计学差别(F=20.148,P<0.001),三组样本的总体均数不全相等,再对三组样本均数进行两两比较,应用LSD法和Bonferroni法检验,两种方法检验结果均显示：B-ALL与T-ALL之间有统计学差别(P<0.05),B-ALL与AML之间有统计学差别(P<<0.05),但T-ALL和AML表达量无统计学差别(P>0.05)。5 ALL不同阶段TAp63 mRNA表达的动态变化动态观察5例初治ALL患者化疗后不同阶段TAp63 mRNA的表达变化,其化疗前均高表达TAp63 mRNA,完全缓解后低表达或不表达TAp63 mRNA,复发后再次高表达TAp63 mRNA。复发时TAp63 mRNA的表达量略高于初治时,但差异无显著性意义(P=0.77,P>0.05)。初治及复发时TAp63表达量显著高于完全缓解时(P=0.00,<0.05),初治及复发时与对照组相比较,表达量有显著差异(P<0.05)。完全缓解组与对照组相比差异无显著性意义(P>0.05)。6 Bcl-2 mRNA在ALL、AML与对照组的表达50例ALL患者中30例表达Bcl-2 mRNA(阳性率60%),31例AML患者中20例表达Bcl-2 mRNA(阳性率64.5%),对照组均不表达(阳性率0)急性白血病组与对照组相比较有显著差异(P<0.05)。ALL与AML两者相比较差异无显著性意义(P>0.05)。7 TAp63 mRNA及Bcl-2 mRNA表达的相关性50例ALL患者TAp63 mRNA及Bcl-2 mRNA在AL中的表达水平有显著相关性(r=0.631,P=-0.00,P<0.05)结论1.TAp63及Bcl-2在急性白血病中的表达明显高于非恶性血液病患者。TAp63及Bcl-2在急性白血病的表达且呈正相关。2.TAp63在ALL的表达显著高于AML,在B-ALL中表达显著高于T-ALL。Bcl-2在AML与ALL的表达无显著性差别。3.TAp63在初治ALL高表达,完全缓解后低表达或不表达,复发后高表达。