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猪传染性胃肠炎（TGE）是由猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）引起的一种以严重腹泻、呕吐和脱水为临床特征的高度接触性传染病。现已成为猪的一种世界性疾病，给养猪业造成极大危害。在TGEV的结构蛋白中，S蛋白是唯一能在动物体内诱导产生中和抗体的主要结构蛋白。因此，S蛋白基因是研究TGEV基因工程疫苗的主要目的基因。本研究的目的是利用RT-PCR技术把S基因5’端包含B、C抗原位点的一段序列（S1）克隆入腺病毒表达载体系统中，构建成重组腺病毒，使S1蛋白在重组腺病毒中获得表达，并在小白鼠体内进行免疫特性研究，为研究TGEV重组腺病毒疫苗奠定基础。 本研究根据GenBank数据库中的TGEV基因序列（NC002306）设计了一对引物，针对S基因5’端包含B、C抗原位点的1026bp的序列（S1），并含有BglⅡ和SalⅠ酶切位点。用RT-PCR技术从国内分离的TGEVNJ株中获得大小为1026bp的PCR产物，经纯化后与穿梭载体pShuttle-CMV同时进行双酶切，分别经回收后连接。连接产物转化DH5α，然后在卡那霉素抗性（Kan+）平板上挑取阳性菌落，37℃过夜培养。提取质粒经PCR、BglⅡ和SalⅠ双酶切鉴定，结果扩增片段与预期片段大小相符；DNA序列分析结果表明，克隆的S1蛋白基因完全符合载体阅读框，扩增的S1基因与TGEVNJ株核苷酸序列符合率99％，氨基酸序列符合率99％。将鉴定正确的线性化重组质粒pShuttle-CMV-S1与骨架载体pAdEasy-1经电转化在大肠杆菌菌株BJ5183中进行同源重组。在具有卡那霉素的LB平板上筛选阳性菌落，然后利用PacⅠ酶对重组质粒进行酶切鉴定，结果与预计的相符，阳性重组质粒命名为rAd-S1；鉴定的重组质粒rAd-S1大量提取，PacⅠ酶酶切线性化，阳离子脂质体法转染到HEK293A细胞，于37℃培养7天后出现细胞病变，收获病毒。经噬斑纯化，用RT-PCR、间接免疫荧光试验（IFA）和Western blot试验鉴定S1基因的转录和表达，结果表明重组腺病毒中的S1蛋白基因能够在HEK293A细胞中转录和表达。将重组病毒在293细胞上连续传代至9代，测定病毒滴度，其TCID50平均可达10-7.7／ml。 为研究TGEV S1蛋白的重组腺病毒免疫效果，将TGEV S1蛋白的重组腺病毒免疫18-20g的小白鼠。分别用皮下、肌肉、滴鼻三种接种途径，每隔14d免疫一次，共免疫三次。检测小白鼠血清TGEV ELISA特异性IgG和IgA抗体。结果显示：在三个