荧光标记VEGF127-133靶向VEGFR-2实验研究

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目的:本研究以肿瘤细胞上VEGFR-2(Vascular endothelial growth factor receptor-2)为靶点,以能与其特异性结合的 VEGF127-133氨基酸短肽配体为靶向分子,并以荧光素作为成像部分,构建荧光标记 VEGF127-133的新型靶向分子探针,并探讨该靶向分子探针在体外对肿瘤细胞靶向性能,为进一步活体内靶向成像奠定实验基础。  方法:(1).细胞免疫荧光实验检测HepG2与HUVEC细胞VEGFR-2表达情况。分为实验组、对照组和空白组。实验组爬片上加抗VEGFR-2的一抗和荧光标记二抗;对照组加等量的荧光二抗;空白组上加等量的PBS。观察各组爬片上细胞的荧光强度。  (2). Western-blot定量检测HepG2与HUVEC细胞VEGFR-2蛋白表达情况。  (3).对比剂偶联。合成荧光标记的VEGF127-133和随机小肽,并进行相关理化数据测试。  (4).细胞荧光实验检测荧光标记VEGF127-133体外对HepG2与HUVEC细胞靶向性及特异性。实验分两批进行。第一批实验组(HepG2与HUVEC细胞爬片)加入FITC标记VEGF127-133,对照组加入FITC标记的随机序列小肽。观察爬片上细胞的荧光强度。第二批实验组(HepG2细胞爬片)与对照组(正常肝细胞爬片)加入等量的FITC标记VEGF127-133,观察爬片上细胞的荧光强度。  (5).小动物活体成像扫描初步检测荧光标记VEGF127-133对HepG2肝癌荷瘤鼠的靶向性能。经小鼠尾静脉实验组注入Cy5.5标记VEGF127-133,对照组注入Cy5.5标记的随机序列小肽,观察荧光在小鼠体内分布情况。  结果:(1).实验组HUVEC及HepG2细胞膜及胞质内均有VEGFR-2表达;对照组及空白组爬片上细胞膜及胞浆内均没有VEGFR-2阳性表达。  (2). Western-blot检测HUVEC细胞及HepG2细胞均有VEGFR-2蛋白的表达。  (3).成功将荧光材料FITC及Cy5.5连接在小肽VEGF127-133和随机小肽上。  (4).体外靶向性试验:FITC标记的靶向小肽对HepG2与HUVEC细胞具有靶向性及特异性,FITC标记的随机序列小肽对HepG2与HUVEC细胞不具有靶向性。  (5).活体试验:Cy5.5标记的靶向探针能对肿瘤区靶向显影。  结论:以VEGF127-133为靶向运载体,FITC或Cy5.5为显像剂的新型靶向分子探针,在体内外具有一定的靶向性,可以靶向肿瘤细胞VEGFR-2,为下一步体内荧光及磁共振成像奠定了基础。
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