车前草抗氧化抗炎谱效关系研究

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目的:建立车前草抗氧化抗炎谱效关系模型,结合“谱”与“效”的研究,阐明车前草抗炎与抗氧化作用的物质基础,为其物质基础及作用机制提供科学依据,也为完善车前草质量评价体系奠定基础。方法:通过DPPH法和ABTS法,以两种自由基清除率的IC50、EC50和维生素C当量为指标,研究不同产地车前草的体外抗氧化活性;通过LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症模型,以炎症因子NO、IL-6和TNF-α含量为指标,研究不同产地车前草的体外抗炎活性;通过高效液相色谱法,考察不同产地车前草指纹图谱的色谱条件,建立不同产地车前草的指纹图谱,通过对比液相色谱峰保留时间和紫外吸收光谱,并联用UPLC-ESI-MS确定其共有峰;通过相似度评价和聚类分析,筛选后续谱效关系研究的最佳车前草批次;基于主成分分析、灰色关联度分析和偏最小二乘回归分析法,建立车前草抗氧化抗炎谱效关系。结果:体外抗氧化活性结果表明,10个不同产地的车前草对DPPH自由基和ABTS自由基均有清除能力,且清除自由基的能力呈浓度依赖性,其中,广东产地车前草对DPPH自由基清除效果最好,河北产地车前草对ABTS自由基清除效果最好;体外抗炎活性研究发现10个不同产地的车前草均能抑制炎症因子NO、IL-6和TNF-α的释放,且抑制作用呈浓度依赖性,贵州毕节、河南和四川产地较其他产地车前草抗炎活性较好;相似度评价和聚类分析结果一致,筛选出相似度大于0.8且聚类分析属于同一类的7个不同产地车前草进行后续谱效关系研究,7个批次产地为陕西、广西、贵州毕节、广东、四川、河南和河北;建立了7个不同产地车前草的指纹图谱,确定了共有峰有19个,指认6号峰为香草酸、8号峰为大车前苷、9号峰为毛蕊花糖苷、10号峰为车前草苷D、17号峰为木犀草素、18号峰为芹菜素,且上述指认峰在不同产地车前草中的含量差异较大;主成分分析将19个共有峰分为五类主成分,第2、5、6、11、13、15、17号峰归为第一类主成分,第3、9、10、12、16号峰归为第二类主成分,第7、18、19号峰归为第三类主成分,第8、14号峰归为第四类主成分,第1、4号峰号峰归为第五类主成分,;灰色关联度分析和偏最小二乘回归分析结果表明,车前草抗氧化活性的主要药效峰为6、8、9、14、15号峰;确定了车前草抗炎活性的主要药效峰为4、6、11、15号峰。结论:基于不同产地车前草的指纹图谱分析,车前草是通过多成分和多途径来协同发挥其抗氧化活性和抗炎活性。本研究有效的分析了两种活性作用的药效成分,在一定程度上诠释了车前草抗氧化和抗炎作用的药效物质基础,有助于车前草的质量控制和作用机制研究。
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