细辛挥发油提取及对牙周炎主要致病菌的作用

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牙周炎是一种侵犯牙周支持组织的慢性感染性疾病,是成人牙齿丧失的首要原因,其主要由龈下的具核梭杆菌、中间普氏菌和牙龈卟啉单胞菌等厌氧菌引起。目前针对利用天然植物高效、安全地防治牙周炎的报道较少,而细辛是我国的一种传统中草药,药理作用广泛,具有镇痛、止咳、抗炎、抗过敏、抗氧化等作用。本研究采用单因素试验考察不同液料比、蒸馏时间、颗粒直径和浸泡时间对挥发油提取率的影响,通过L9(3)3正交试验确定挥发油提取的最佳工艺。结果表明,对挥发油提取率影响作用大小为液料比>蒸馏时间>颗粒直径。最优水平组合为液料比17、颗粒直径2.5<D95≤3.8mm和蒸馏时间2h。应用气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)分析细辛挥发油单体组分,共鉴定出31种成分,主要为甲基丁香酚、3,5-二甲氧基甲苯和黄樟醚。采用液体二倍稀释法和平板涂布法测定细辛挥发油对牙周炎主要致病菌(具核梭杆菌、中间普氏菌、牙龈卟啉单胞菌)及血链球菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度。结果表明,细辛挥发油对具核梭杆菌、中间普氏菌、牙龈卟啉单胞菌和血链球菌的最小抑菌浓度分别为0.01%、0.04%、0.005%和0.04%,最小杀菌浓度分别为0.02%、0.08%、0.005%和0.32%。评价细辛挥发油对小鼠牙槽骨吸收的抑制作用,管饲100μL含2%羧甲基纤维素钠具核梭杆菌的菌悬液(109CFU/mL)于小鼠口腔,每隔2天1次,共3次,以此建立小鼠牙周炎模型。给予实验组小鼠2%细辛挥发油100μL,阴性对照组小鼠2%低粘度的羧甲基纤维素钠,每隔3天1次,持续6周;空白对照组小鼠一直饮用无菌水,不做其他处理。结果表明,阴性对照组与空白对照组相比,小鼠釉质骨质界到牙槽嵴顶(CEJ-ABC)的距离明显增大,牙槽骨吸收呈极显著差异(P<0.01);实验组与阴性对照组相比,小鼠釉质骨质界到牙槽嵴顶的距离减小,牙槽骨吸收显著下降(P<0.05)。评价细辛挥发油在体内的安全性,给予小鼠20%细辛挥发油100μL,每天1次,持续20天,制作小鼠肝脏、肾脏组织的病理切片,经苏木精-伊红(HE)染色,结果表明,挥发油实验组和空白对照组未见明显不同。综上所述,细辛挥发油对作为牙周炎主要致病菌的具核梭杆菌、中间普氏菌和牙龈卟啉单胞菌具有明显的抗菌活性,且治疗由具核梭杆菌所致的小鼠实验性牙周炎效果良好,细辛挥发油有望成为一种治疗牙周炎的新型天然药物。
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