蒙药复方“茵达日-4”对肠易激综合征的药效评价及作用机制研究

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[目的]采用母子分离+醋酸灌肠+束缚应激的方法模拟肠易激综合征,通过内脏痛觉敏感性测定、免疫组化和菌群分析等一系列方法,评价蒙药复方茵达日-4对肠易激综合征的治疗作用,并探讨茵达日-4的作用机制。[方法]1、选取健康SPF级SD孕鼠18只,随机分组分为IBS组(n=15)和空白对照组(n=3),待其生产后,空白对照组不做任何处理,IBS组崽鼠在出生后第2天至第45天采取母子分离+醋酸+束缚的方法造模,造模成功后的35只雄鼠随机分为5组,分别为模型组(Model)、茵达日-4高剂量组(YDRH)、茵达日-4中剂量组(YDRM)、茵达日-4低剂量组(YDRL)、曲美布汀组(QMBT)。为避免雌激素水平波动对实验结果的影响,本研究仅对雄性大鼠进行了分析。2、在大鼠出生后第69天到第78天进行药物干预,待干预结束后采用内脏痛觉敏感性测定检测各组肠道痛觉阈值,采用粪便含水率测定检测各组粪便含水量的改变,采用HE染色观察各组结肠组织病理变化,采用免疫组化测定各组结肠中5-HT表达水平,采用高通量测序测定各组崽鼠肠道菌群的差异。[结果]1、模型组在40-80mmHg区间的AWR评分均显著高于对照组(p<0.01或p<0.05)。茵达日-4高剂量组在40-100mmHg区间AWR评分均显著低于模型组(p<0.01或p<0.05)。茵达日-4治疗可显著降低实验性IBS大鼠的内脏超敏反应,且呈剂量依赖性。2、模型组粪便含水量低于对照组,药物干预后有所升高,但各组之间没有显著性差异。3、所有大鼠结肠的肠粘膜结构完整,未见任何结肠组织器质性病变。干预组与模型组组织学特征无明显差异,固有层中性粒细胞未见明显炎性浸润。4、模型组结肠中5-HT表达显著高于对照组(P<0.01)。与模型组比较,YDRH组结肠中5-HT表达显著减少(p<0.01)。5、模型组、YDRH组和对照组之间Alpha多样性未见显著性差异,Beta多样性有显著性差异,三组之间菌群结构有显著差异,且模型组和对照组相比,Hellicobacter属菌群丰度升高,Butyricimonas属菌群丰度降低,YDR-4干预后,Hellicobacte属菌群丰度降低,Butyricimonas属菌群丰度升高。[结论]1、通过母子分离+醋酸灌肠+束缚的方法可以构建稳定的肠易激综合征模型。2、茵达日-4对肠易激综合征大鼠有治疗作用,可显著改善其内脏痛觉高敏感性。3、茵达日-4干预后,与模型组比较,结肠中5-羟色胺表达水平降低,且有显著性差异。4、茵达日-4干预后,与模型组比较,结构和组成发生显著改变,有害菌Hellicobacte显著减少,有益菌Butyricimonas显著增多。
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