发根农杆菌介导的水母雪莲遗传转化及次生代谢的相关研究

来源 :中国科学院研究生院 中国科学院大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:nish2008
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本论文以发根农杆菌转化水母雪莲,诱导形成毛状根,建立了发根农杆菌介导的水母雪莲遗传转化体系和水母雪莲毛状根培养体系。利用HPLC方法测定水母雪莲毛状根中有效成分的含量,秋水仙碱和东莨菪内酯的含量与原植物相比显著提高。   首先,建立了发根农杆菌A4菌株介导的水母雪莲遗传转化体系。正交试验结果显示外植体类型和菌液浓度对毛状根的诱导频率具有极显著的作用,诱导毛状根形成的最适转化条件:OD=0.6的A4菌株转染水母雪莲子叶外植体。通过分子生物学检测确定T-DNA插入水母雪莲基因组并能够稳定表达。   其次,筛选出了具有激素自主型,生长快速的毛状根系,并对培养基,接种量,光照条件等因素在毛状根生长中的影响作用进行了研究。水母雪莲毛状根在液体培养条件下的生长曲线呈“S”形,可分为生长延迟期、快速生长期和平台期。   最值得关注的是水母雪莲毛状根中次生代谢产物含量发生显著变化。利用HPLC技术检测秋水仙碱、和东莨菪内酯,结果显示水母雪莲毛状根中秋水仙碱及东莨菪内酯的含量显著高于原植物和愈伤组织中的。培养过程中各因素对毛状根中有效成分含量有显著影响作用。毛状根中有效成分积累在一年内有季节性变化。   水母雪莲毛状根能够形成自发苗,这一现象在以往雪莲毛状根培养研究中未见报道。自发苗和再生植株都具有发根农杆菌转化植株的典型特征:植株矮化、叶窄长、边缘光滑,分枝多等特征。与野生植株明显的不同是转化植株具有多分枝,形成多个花序,在6-10月内完成开花,花序形状变小。
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