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目的:研究氯胺酮慢性给药对成年哺乳动物脑的神经毒性作用,以c-Fos和pCREB等蛋白表达检测氯胺酮给药对脑的影响,以神经元的标志物NeuN和PV等对慢性氯胺酮给药对神经元的损伤进行评价。
方法:80只成年雄性昆明小鼠随机分为4组,分别为:正常对照组(sham组)、50 mg/kg氯胺酮组(K1组)、100 mg/kg氯胺酮组(K2组)、200 mg/kg氯胺酮组(K3组),腹腔注射氯胺酮或生理盐水,每5天为给药间隔,连续注射6次。在最后一次注射5天后,小鼠被灌注固定,使用免疫组织化学检测前脑内c-Fos,pCREB,NeuN和PV的表达情况。
结果:
①免疫组织化学反应结果显示正常成年昆明小鼠前脑内c-Fos基础表达较高;
②氯胺酮对前脑(前扣带回皮质、额皮质、顶皮质、隔外侧核、梨状前皮质、扣带后回皮质、伏隔核、尾壳核、压部皮质、海马CA1区和CA3区等)内c-Fos基础表达起抑制效应,且呈剂量依赖性。各组小鼠前脑内c-Fos阳性细胞数均明显低于正常对照组,且随氯胺酮给药剂量的增加而呈下降趋势;K2组、K3组与K1组比较,前脑内c-Fos阳性细胞数均显著减少;K3组与K2组比较,差异无统计学意义;
③氯胺酮给药诱导前脑不同脑区(前扣带回皮质、额皮质、顶皮质、隔外侧核、梨状前皮质、扣带后回皮质、伏隔核、尾壳核、压部皮质、海马CA1区和CA3区等)的CREB的磷酸化。各组昆明小鼠前脑内pCREB阳性细胞数显著高于正常对照组(PPir除外),且随氯胺酮给药剂量的增加而呈上升趋势,K2组、K3组与K1组比较,表达增加,有显著性差异(ACC,PC,RS,CA3除外);K3组与K2组比较,不同脑区差异不同;
④pCREB与c-Fos在前脑的表达成相反变化,随氯胺酮给药剂量的增加而表达增强;
⑤与正常对照组比较,K3组前脑(前扣带回皮质、压部皮质和海马CA3区等)内NeuN神经元表达显著减少;
⑥与正常给药剂量的增加而表达增强;与正常对照组比较,K3组前脑(前扣带回皮质、压部皮质和海马CA3区等)内NeuN神经元表达显著减少。与正常对照组比较,氯胺酮给药组昆明小鼠前脑(前扣带回皮质、额皮质、顶皮质、扣带后回皮质、压部皮质和丘脑网状核等)内PV神经元表达减少。
结论:
①正常成年昆明小鼠前脑内c-Fos基础表达较高;
②慢性氯胺酮给药对前脑内c-Fos表达起抑制作用,且呈剂量依赖性;
③慢性氯胺酮给药导致CREB磷酸化水平增加,抑制c-Fos表达;
④慢性氯胺酮给药对前脑Cg,RS和CA3的NeuN神经元的具有神经毒性作用;
⑤慢性氯胺酮给药对成年脑的PV阳性神经元产生损伤。