我们克隆出草鱼两种70kD大小热休克蛋白:诱导性热休克蛋白(Hsp70)和组成型热休克蛋白(Hsc70)。其中Hsp70 cDNA全序列为2250 bp,开放阅读框为1932 bp,而Hsc70 cDNA全序列为2449 bp,开放阅读框为1953 bp。组织分布结果表明Hsp70和Hsc70在腮,肾,头肾和外周血淋巴细胞中有较高的表达。采用外周血淋巴细胞为细胞模型,检测LPS对Hsc70和Hsp70 mRNA和蛋白水平的影响。结果表明:LPS以时间依赖和剂量依赖形式提高Hsp70 mRNA的表达,而对Hsc70则没有作用。胞内两者蛋白水平的表达显示与基因表达一致的特征。进一步研究表明,在胞外可检测到Hsp70的分泌,而且LPS能抑制这一分泌作用,提示在LPS刺激的外周血淋巴细胞模型中,Hsp70胞内蛋白的含量与胞外蛋白的分泌可能存在一种动态平衡。为进一步研究胞外Hsp70蛋白功能,我们将草鱼Hsp70蛋白开放阅读框克隆到pET30a(+)载体上,构建(BL21(DE3)-pET30a(+))原核表达系统,并通过镍亲和层析得到纯化样品(rgcHsp70)。实时PCR分析显示rgcHsp70能够明显提高草鱼头肾白细胞中TNF-α和IL-1βmRNA表达。上述结果不仅对LPS调节Hsp70和Hsc70基因表达,蛋白质合成和分泌提出了新的观点,而且为进一步研究Hsp70在硬骨鱼中的免疫学功能奠定了基础。