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背景与目的肿瘤,作为严重威胁人类健康并且影响人类生活质量的疾病之一,是临床科研工作者一直研究探索的重点项目,肿瘤分为良性肿瘤及恶性肿瘤,其中恶性肿瘤尤其影响人类生命。淋巴瘤作为一种起源于淋巴结以及淋巴结外的淋巴组织恶性肿瘤,在儿童、年轻人好发肿瘤中是最常见的恶性肿瘤之一。世界卫生组织(WHO)淋巴瘤分类中定义各种类型的淋巴瘤都应该具有其独立的组织病理学特点、免疫表型、分子遗传学以及临床表现。淋巴瘤定义为两大类,即霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤。在2016年WHO更新版的造血与淋巴组织肿瘤分类中,非霍奇金淋巴瘤的包括60余种不同种类,其被认为是所有肿瘤中分类最为复杂的类型。结外NK/T细胞淋巴瘤(Extranodal NK/T cell lymphoma,ENKTCL)是一种罕见的并且具有侵袭性的非霍奇金淋巴瘤亚型,其与潜在Epstein Barr病毒(EBV)感染密切相关,此类型淋巴瘤具有较强的侵袭性,并且预后不良,主要发生于亚洲和拉丁美洲的国家,其是我国淋巴瘤最常见的亚型之一。针对传统的蒽环类化疗作用,结外NK/T细胞淋巴瘤与其他类型的淋巴瘤相对比,在治疗方面上其具有较强的抵抗力。目前,因结外NK/T细胞淋巴瘤的恶性程度高,侵袭性强,对人类生命的威胁程度高,在标准化治疗方法上还没有统一的认定,因此研究结外NK/T细胞淋巴瘤的发生发展机制,相关预后指标或者寻找其新的治疗靶点具有着重要的意义。微小RNA(microRNA,miRNA)是小的非编码RNA,由18-25个核苷酸组成,通过几种不同机制来发挥作用,可以在转录后水平对靶基因起到负性调控的作用,它们在调节细胞的生长、发育、凋亡、侵袭、转移和造血过程中发挥着重要的生物学作用。MiRNA通过阻止mRNA的翻译或者调节mRNA的降解来调控靶基因表达,每个类型的细胞miRNA类型及表达情况各不相同,因此可以将miRNA作为靶细胞的标记物。因此,检测并分析miRNA在肿瘤细胞中的类型及表达量可以作为淋巴瘤治疗及分析预后的重要指标。MiR-21-5p是由miR-21前体的5’端臂加工而来的,人类mi R-21基因位于染色体17q23.2正链。肿瘤的发生发展过程中包括很多miRNA的改变,其中就涉及miR-21-5p,其表达与部分肿瘤细胞的浸润、转移具有明确的相关性。例如,研究表明,高表达的miR-21-5p可以在非小细胞癌中调节肿瘤细胞的生长能力、浸润以及转移;同样,低表达的miR-21-5p可以降低肿瘤细胞中相关蛋白的表达水平。MiR-150-5p是由miR-150前体的5’端臂加工而来的,根据相关研究证据表明,miR-150-5p在某些肿瘤发生发展中发挥着重要的作用,其中就包括淋巴造血系统肿瘤。miR-150家族在恶性和正常的B细胞中可以调节转录因子叉头型基因P1(Forkhead box p2,FOXP1)和接头蛋白GAB1蛋白的表达水平,同时可以影响BCR信号通路。研究表明,其被认为有着促进胃癌细胞增殖的作用,也被认为在骨肉瘤中有超过正常组织中表达量50倍的过度表达情况。根据已发表文献显示,miR-21-5p和miR-150-5p在肿瘤中发挥着重要的作用,目前在关于结外NK/T细胞淋巴瘤的相关文献中并没有关于mi R-21-5p和miR-150-5p的具体研究。因此,本课题将miR-21-5p和miR-150-5p应用于结外NK/T细胞淋巴瘤的研究,采用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)检测miR-21-5p和miR-150-5p在NK/T细胞淋巴瘤细胞中的表达情况以及采用原位杂交技术(In situ hybridization,ISH)检测mi R-21-5p和miR-150-5p在结外NK/T细胞淋巴瘤组织中的表达情况,结合相关临床病理参数以及预后指标分析探讨其在结外NK/T细胞淋巴瘤中所发挥的关键性作用,寻找与其治疗相关作用的新靶点,为临床上患者的治疗提供有效的帮助。方法1 miR-21-5p和miR-150-5p在NK/T细胞淋巴瘤细胞系中的表达情况由生工生物工程股份有限公司设计合成mi R-21-5p和miR-150-5p的特异性引物,内参是U6特异性引物,利用qRT-PCR检测人类正常NK细胞以及NK/T细胞淋巴瘤细胞系NK92和YT中miR-21-5p和miR-150-5p的表达量。2 miR-21-5p和miR-150-5p在结外NK/T细胞淋巴瘤石蜡切片组织中的表达及临床意义2.1收集并筛选结外NK/T细胞淋巴瘤的石蜡组织标本40例,以20例鼻腔粘膜慢性炎的标本作为对照组织。2.2采用原位杂交法检测结外NK/T细胞淋巴瘤标本组织及对照组织鼻腔粘膜慢性炎的标本组织中miR-21-5p和miR-150-5p相对表达量。2.3用SPSS 21.0软件对miR-21-5p和miR-150-5p表达与结外NK/T细胞淋巴瘤患者临床病理参数的关系进行统计学分析,包括年龄、性别、B症状、血清LDH水平、Ann Arbor临床分期及IPI评分。2.4单因素及多因素分析miR-21-5p和miR-150-5p表达与以上临床病理参数及患者临床预后的相关性。结果1 miR-21-5p和miR-150-5p在NK/T细胞淋巴瘤细胞株NK92及YT中的表达与人类正常NK细胞株比较,表达量明显上调。2与对照组鼻腔粘膜慢性炎相比,结外NK/T淋巴瘤组织中的miR-21-5p和miR-150-5p的表达水平明显增高。3 miR-21-5p的表达水平与患者年龄、性别、血清LDH水平、B症状、Ann Arbor临床分期以及IPI评分无关(P>0.05)。miR-150-5p的表达水平与患者的IPI评分有关(P<0.05),而与患者年龄、性别、血清LDH水平、B症状以及Ann Arbor临床分期无关(P>0.05)。4 miR-21-5p和miR-150-5p的表达与患者总生存率无明显相关性(P>0.05),IPI评分(≥2分)可能为患者预后不良的独立危险因素。结论1 miR-21-5p和miR-150-5p在结外NK/T细胞淋巴瘤石蜡组织及NK/T细胞淋巴瘤细胞系中的表达均上调,提示两种miRNA可能参与了结外NK/T细胞淋巴瘤的发生发展过程。2 IPI评分(≥2分)是患者预后不良的独立危险因素,而miR-150-5p表达水平与患者IPI评分有显著相关性,提示该mi RNA有可能作为结外NK/T细胞淋巴瘤的新的预后标记,该结论需要进一步扩大样本量进行预后研究。